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文献和实验。1.1.2 N-羟基琥珀酰亚胺酯法:该方法原理与对硝基酚法一致,唯一不同点在于线性多肽的C端羧基在缩合剂EDC的存在下与N-羟基琥珀酰亚胺(HONSu)缩合,形成直链多肽的N-羟基琥珀酰亚胺酯。应用这种方法Toshihisa等在吡啶溶液中合成了cyclo(Pro-Val-Pro-Val)和cyclo(Pro-D-Val-Pro-D-Val),收率分别为15%和12%。二者为非对映异构体,前者具有植物生长抑制作用,后者却表现为植物生长促进作用。1.1.3五氟苯酚酯法:这类活泼酯用于环肽的合成是近年才发展
15N或15N/13C标记;分子量大于20000的蛋白质,在条件允许的情况下,还可在15N/13C标记的同时进行2H标记,以提高谱图质量。对需要全标记的蛋白质,通常将细菌放在M9培养基里生长,以15NH4Cl为氮源,[13C6]-葡萄糖为碳源。对那些同时还需要2H标记的蛋白质,则还须将培养基里H2O用D2O来代替。若须选取某一种氨基酸残基进行标记,则通常采用营养缺陷型的菌株。另外还有其他许多种可以采用的标记方法,以满足不同实验目的的需要。最近,Nagayama等人将一个很大的蛋白分段
Chromatography,IMAC)是近年来发展起来的一种亲和方法。其固定相基质上鳌合了一些金属离子,如Cu2+、Ni2+、Fe3+等,此柱可通过配为键鳌合侧链含有Lys、Met、Asp、Arg、Tyr、Glu和His的多肽,特别是肽序列中含有His-X-X-X-His的结构最易结合到金属离子亲和柱上,纯化效果较好[14]。其中胰岛素样生长因子(Insulin-Like Growth Factor,IGF)、二氢叶酸还原酶融合蛋白等均用此方法分离到纯度较高的产品。 Chaiken等[15]人报道了另一种亲和
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