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Alanopine脱氢酶 (ADH)活性测定试剂盒

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  • ￥520
  • wksubio
  • WS7880F
  • 国内
  • 2025年12月30日
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    上海瓦兰生物科技有限公司
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    • 英文名：

      Alanopine脱氢酶 (ADH)活性测定试剂盒 Alanopine脱氢酶 (ADH)活性测定试剂盒 Alanopine Dehydrogenase (ADH) Activity Determination Kit

    • CAS号：

      WS7880F

    • 保质期：

      3个月

    • 供应商：

      上海瓦兰生物

    • 保存条件：

      4℃

    • 规格：

      48T

    本试剂盒仅供科研使用
    Alanopine 脱氢酶(ADH)活性测定试剂盒说明书
    （货号：WS7880F 紫外法 48 样）
    一、产品简介：
    海洋无脊椎动物主要存在 4 种无氧代谢途径，其中葡萄糖-opine 途径在无氧代谢初期发
    挥了重要作用，无脊椎动物中特有的 Opine 脱氢酶 (OpDHs)保证了这一过程的顺利进
    行。Alanopine 脱氢酶(ADH；EC 1.5.1.17 )是 Opine 脱氢酶 (OpDHs)系列酶中的一种。
    Alanopine 脱氢酶(ADH)催化*酮酸和特异底物丙氨酸反应生成相应的亚氨基酸，同时
    使 NADH 发生氧化，通过检测 NADH 在特征吸收波长 340nm 处的下降速率即可得出 ADH
    酶活性大小。
    二、试剂盒的组成和配制：
    试剂名称
    规格
    保存要求
    备注
    提取液
    液体 60mL×1 瓶
    4℃保存
    试剂一
    粉剂 mg×2 支
    -20℃保存
    用前甩几下或离心使粉剂落入底部，每
    支分别加 0.55mL 蒸馏水溶解备用。用
    不完的试剂分装后-20℃保存，禁止反
    复冻融，一周内用完。
    试剂二
    液体μL×1 支
    4℃保存
    用前甩几下或离心使试剂落入底部，再
    加 1.1mL 蒸馏水溶解备用。
    试剂三
    液体 32mL ×1 瓶
    4℃保存
    三、所需的仪器和用品：
    紫外分光光度计、1mL 石英比色皿（光径 1cm）、台式离心机、可调式移液器、研钵、
    冰和蒸馏水。
    四、Alanopine 脱氢酶(ADH)活性测定：
    建议正式实验前选取 2 个样本做预测定，了解本批样品情况，熟悉实验流程，避免实验
    样本和试剂浪费！
    1、 样本制备：
    ① 组织样本：
    称取约0.1g组织样本，加入1mL提取液，进行冰浴匀浆。12000rpm 4℃离心10min，
    取上清，置冰上待测。
    【注】：若增加样本量，可按照组织质量（
    g）：提取液体积(mL)为 1：5~10 的比例进行提取。
    ② 细菌/细胞样本：
    先收集细菌或细胞到离心管内，离心后弃上清；取 500 万细菌或细胞加入 1mL 提取
    液；冰浴超声波破碎细菌或细胞（冰浴，功率 20％或 200W，超声 3s，间隔 10s，重复
    30 次）；12000rpm，4℃离心 10min，取上清，置冰上待测。
    【注】：若增加样本量，可按照细菌或细胞数量（104个）：提取液体积(mL)为 500~1000：1 的比例进行
    提取。
    2、上机检测：
    ① 紫外分光光度计预热 30min 以上，调节波长至 340nm，蒸馏水调零。
    ② 在 1mL 石英比色皿（光径 1cm）中依次加入：
    试剂名称（
    μL）
    测定管
    样本
    60
    试剂一
    20
    试剂二
    20本试剂盒仅供科研使用
    2
    试剂三
    600
    混匀，室温（25℃）下，于 340nm 读取
    吸光值 A1，5min 后读取吸光值 A2，
    △A= A1-A2。
    【注】 1.若 10s 后反应体系未稳定可延长到 1min 后再读取 A1 值。
    2.若△A 的值小于 0.005，可以适当延长反应时 T（如由 5min 增至 10min）读取 A2，或适当加
    大样本量 V1（如增至 100μL，则试剂三相应减少），则改变后的 T 和 V1 需代入计算公式重
    新计算。
    3. 若起始值 A1 太大如超过 2（如颜色较深的样本），可以适当减少样本加样量 V1（如减至
    30μL，则试剂三相应增加），则改变后的 V1 需代入计算公式重新计算。
    4. 若ΔA 的值大于 0.35，则需减少反应时间 T（如减至 2min），则改变后的反应时间 T 需代入
    计算公式重新计算。
    5. 若下降趋势不稳定，可以每隔 20S 读取一次吸光值，选取一段线性下降的时间段来参与计
    算，相对应的 A 值也代入计算公式重新计算。
    五、结果计算：
    1、按样本蛋白浓度计算：
    定义：每毫克组织蛋白在每分钟内氧化 1 nmol NADH 所需酶量定义为一个酶活力单位。
    ADH(nmol/min/mg prot)=[ΔA×V2÷(ε×d)×109]÷(V1×Cpr) ÷T=375.13×ΔA÷Cpr
    2、按样本鲜重计算：
    定义：每克组织在每分钟内氧化 1nmol NADH 所需酶量定义为一个酶活力单位。
    ADH(nmol/min/g 鲜重)=[ΔA×V2÷(ε×d)×109]÷(W×V1÷V)÷T=375.13×ΔA÷W
    3、按细菌或细胞密度计算：
    定义：每一万个细菌或细胞每分钟内氧化 1nmol NADH 所需酶量定为一个酶活力单位。
    ADH(nmol/min/104 cell)=[ΔA×V2÷(ε×d)×109]÷(500×V1÷V)÷T=0.75×ΔA÷W
    V---加入提取液体积，1 mL；
    V1---加入样本体积，0.06mL；
    V2---反应体系总体积，7×10-4 L；
    d---光径，1cm；
    ε---NADH 摩尔消光系数，6.22×103 L/mol/cm； W---样本质量，g；
    T---反应时间，5min；
    500---细菌或细胞总数，万；
    Cpr---蛋白浓度（mg/mL），建议使用本公司的 BCA 蛋白含量测定试剂盒。

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