本试剂盒仅供科研使用
乳酸脱氢酶（Lactate Dehydrogenase，LDH）试剂盒说明书
（货号：WS4080F 分光法 48 样）
一、产品简介：
乳酸脱氢酶 LDH（EC 1.1.1.27）是一种氧化还原酶，催化*酮酸与乳酸之间的相互转
化，广泛存在于动物、植物、微生物和培养细胞中，通常测量 LDH 来评估组织或细胞
的损伤状况。
本试剂盒提供一种快速、灵敏的检测方法：乳酸脱氢酶（LDH）催化乳酸和 NAD+反
应生成丙*酸和 NADH，产生的 NADH 与特异的显色剂反应，产生在 450nm 处有最大
吸收峰的黄色物质，通过检测该黄色物质在 450nm 的增加速率，进而计算出乳酸脱氢酶
活性的大小。
二、试剂盒的组成和配制：
试剂名称
规格
保存要求
备注
提取液
液体 100mL×1 瓶
4℃保存
试剂一
液体 4.2mL×1 瓶
4℃保存
试剂二
液体 2.1mL×1 瓶
4℃保存
试剂三
液体 6mL×1 瓶
4℃保存
标准品
粉体 mg×1 支
4℃保存
若重新做标曲，则用到该试剂
【注】：粉剂量在 mg 级别，使用前用手甩几次或者进行离心，打开直接加入要求的试剂即可。
三、所需的仪器和用品：
可见分光光度计、1mL 玻璃比色皿（光径 1cm）、恒温水浴锅、台式离心机、可调式
移液器、研钵、冰和蒸馏水。
四、乳酸脱氢酶（LDH）活性检测：
建议正式实验前选取 2 个样本做预测定，了解本批样品情况，熟悉实验流程，避免实验
样本和试剂浪费！
1、样本制备：
① 组织样本：称取约 0.1g 组织，加入 1mL 提取液，进行冰浴匀浆。12000rpm，4℃离
心 10min，取上清，置冰上待测。
【注】：若增加样本量，可按照组织质量（
g）：提取液体积(mL)为 1：5~10 的比例提取
② 细菌/细胞样本：
先收集细菌或细胞到离心管内，离心后弃上清；取 500 万细菌或细胞加入 1mL 提取液；
超声波破碎细菌或细胞（冰浴，功率 20％或 200W，超声 3s，间隔 10s，重复 30 次）；
12000rpm，4℃离心 10min，取上清，置冰上待测。
【注】：若增加样本量，可按照细菌或细胞数量（104 个）：提取液体积（mL）为 1000~5000：1 的比
例进行提取
③ 液体样本：澄清的液体样本直接检测，若浑浊则离心后取上清检测。
2、上机检测：
1
可见分光光度计预热 30min 以上，调节波长至 450nm，蒸馏水调零。
2
所有试剂解冻至室温（25℃）
3
在 1mL 玻璃比色皿中依次加入：
试剂名称（μL）
测定管
样本
40
提取液
560本试剂盒仅供科研使用
2
【注】：1. 若ΔA 在零附近，可以延长反应时间 T（如：30min 或更长），或增加样
本量 V1（如增至 80μL，则提取液相应减少）；则调整后加样体积 V1
和反应时间 T 需代入计算公式重新计算。
2. 若样本自身含有高浓度的还原型物质（如 VC 等），需增加一个样本
自身对照：40μL 样本+640μL 提取液+80μL 试剂一+40μL 试剂二，检
测同测定管，ΔA=（A2-A1）测定-（A2-A1）对照。
五、结果计算：
1、标准曲线：y = 0.0374x + 0.0071；x 是 NADH 摩尔质量（nmol），y 是ΔA。
2、按样本蛋白浓度计算：
酶活性定义：每毫克组织蛋白每分钟催化 1 nmol 乳酸转化成*酮酸定义为一个酶活力单位。
LDH（nmol/min/mg prot）=[（ΔA-0.0071）÷0.0374]÷(V1×Cpr)÷T =66.9×（ΔA-0.0071）÷Cpr
3、按样本鲜重计算：
酶活性定义：每克组织每分钟催化 1 nmol 乳酸转化成丙*酸定义为一个酶活力单位。
LDH（nmol/min/g 鲜重）=[（ΔA-0.0071）÷0.0374]÷(W×V1÷V)÷T=66.9×（ΔA-0.0071）÷W
4、按细菌/细胞密度计算：
酶活性定义：每 1 万个细菌/细胞每分钟催化 1 nmol 乳酸转化成丙*酸定义为一个酶活单位。
LDH（nmol/min/104 cell）= [（ΔA-0.0071）÷0.0374]÷(500×V1÷V)÷T =0.134×（ΔA-0.0071）
5、按液体体积计算：
酶活性定义：每毫升液体每分钟催化 1 nmol 乳酸转化成*酮酸定义为一个酶活力单位。
LDH（nmol/min/mL）=[（ΔA-0.0071）÷0.0374] ÷V1÷T=66.9×（ΔA-0.0071）
V：加入提取液体积，1 mL；
V1：加入样本体积，0.04mL；
T：反应时间，10min；
W：样本质量，g；
500：细胞或细菌总数；500 万；
Cpr：蛋白质浓度，mg/mL；建议使用本公司的 BCA 蛋白含量检测试剂盒。
附：标准曲线制作过程：
1 制备标准品母液（1nmol/μL）：向标准品 EP 管里面加入 1.41ml 蒸馏水（母液需在两
天内用且-20℃保存）。
2 把母液稀释成六个浓度梯度的标准品：0, 0.2, 0.4, 0.6, 0.8, 1. nmol /μL。也可根据实
际样本来调整标准品浓度。
3 依据测定管的加样表操作，根据结果即可制作标准曲线。
试剂一
80
试剂二
40
试剂三
80
混匀，在室温（25℃）下，立即于 450nm 处
读取 A1 值，10min 后读取 A2 值，ΔA=A2-A1。
文献和实验
