3-磷酸甘油醛脱氢酶(NADH-GAPDH)试剂盒产品图

3-磷酸甘油醛脱氢酶(NADH-GAPDH)试剂盒

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  • ￥1980 - 3490
  • wksubio
  • WS3480F
  • 国内
  • 2026年06月04日
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    • 详细信息
    • 文献和实验
    • 技术资料
    • 库存：

      大量

    • 英文名：

      3-Phosphate Glyceraldehyde Dehydrogenase (NADH-GAPDH) Kit

    • CAS号：

      WS3480F

    • 保质期：

      3个月

    • 供应商：

      上海瓦兰生物

    • 保存条件：

      4℃

    • 规格：

      24T/48T

    规格：24T产品价格：￥1980.0
    规格：48T产品价格：￥3490.0
    本试剂盒仅供科研使用
    3-磷酸甘油醛脱氢酶(NADH-GAPDH)试剂盒说明书
    （货号：WS3480F 分光法 48 样）
    一、产品简介：
    3-磷酸甘油醛脱氢酶分为胞质型和质体型，细胞质中的 3-磷酸甘油醛脱氢酶（EC
    1.2.1.12）是糖酵解的中枢环节之一，特异的以 NADH 为辅酶，催化 3 磷酸甘油醛形
    成 1,3 二磷酸甘油酸的可逆反应，与糖异生途径及体内血糖浓度的维持、糖尿病的发
    生密切相关，在机体糖、脂、蛋白代谢紊乱疾病中发挥重要作用。
    本试剂盒耦联 3-磷酸甘油酸激酶，以三磷酸甘油酸为底物，于 340nm 处测定 NADH
    的下降速率来得出 NADH-GAPDH 酶活性的大小。
    二、试剂盒的组成和配制：
    试剂名称
    规格
    保存要求
    备注
    提取液
    液体 50mL×1 瓶
    4℃保存
    试剂一
    粉剂 mg×1 支
    4℃保存
    用前甩几下或离心使试剂落入底
    部，再加 1.1mL 蒸馏水溶解备用。
    试剂二
    粉剂 mg×3 支
    -20℃保存
    用前甩几下或离心使试剂落入底
    部，每支加 0.4mL 蒸馏水溶解，用
    不完的试剂分装后-20℃保存，禁止
    反复冻融，三天内用完。
    试剂三
    液体μL×1 支
    -20℃保存
    用前甩几下或离心使试剂落入底
    部，再加 1.1mL 蒸馏水溶解备用。
    试剂四
    液体 30mL×1 瓶
    4℃保存
    试剂五
    粉剂 mg×1 支
    4℃保存
    用前甩几下或离心使试剂落入底
    部，再加 1.1mL 蒸馏水溶解备用。
    三、所需的仪器和用品：
    紫外分光光度计、1mL 石英比色皿（光径 1cm）、可调式移液器、天平、震荡仪、低
    温离心机、研钵。
    四、3-磷酸甘油醛脱氢酶(NADH-GAPDH)活性测定：
    建议正式实验前选取 2 个样本做预测定，了解本批样品情况，熟悉实验流程，避免实验
    样本和试剂浪费！
    1、样本制备：
    ① 组织样本
    称取约 0.1g 组织样本，加入 1mL 提取液，冰浴匀浆，12000rpm，4℃离心 10min，
    取上清，置冰上待测。
    【注】：若增加样本量，可按照组织质量（
    g）：提取液体积(mL)为 1：5~10 的比例进行提取。
    ② 细菌/细胞样本
    先收集细菌或细胞到离心管内，离心后弃上清；取约 500 万细菌或细胞加入 1mL 提
    取液，超声波破碎（冰浴，功率 200W，超声 3s，间隔 10s，重复 30 次）；12000rpm，
    4℃离心 10min，取上清，置冰上待测。
    【注】：若增加样本量，可按照细菌或细胞数量（104 个）：提取液体积（mL）为 500~1000：1 的比例提
    取
    2、上机检测：
    ① 紫外分光光度计预热 30min，调节波长至 340nm，设定温度 25℃，蒸馏水调零。
    ② 所有试剂解冻至室温（25℃）。本试剂盒仅供科研使用
    2
    ③ 在 1mL 石英比色皿中依次加入：
    试剂名称（μL）
    测定管
    样本
    60
    试剂一
    20
    试剂二
    20
    试剂三
    20
    试剂四
    600
    混匀，室温（25℃）条件下，孵育 10min
    试剂五
    20
    轻轻混匀，室温（25℃）条件下，30s 时于 340nm
    处读取吸光值 A1，10min 后再读取 A2，
    ΔA=A1-A2。
    【注】1.若△A 的值在零附近，可以适当延长反应时间到 20min 后读取 A2，改变后的反应时间
    需代入计算公式重新计算。或适当加大样本量(如 100μL，则试剂四相应减少)，则改变
    后的加样体积需代入计算公式重新计算。
    2. 若下降趋势不稳定，可以每隔 20S 读取一次吸光值，选取一段线性下降的时间段来参与
    计算，相对应的 A 值也代入计算公式重新计算。
    3. 若起始值 A1 太大如超过 2（如颜色较深的植物叶片，一般色素较高，则起始值相对会
    偏高），可以适当减少样本加样量，则改变后的加样体积需代入计算公式重新计算。
    或向待测样本中加少许活性炭混匀静置 5min 后 12000rpm, 4℃离心 10min，上清液用于
    检测；
    4. 若ΔA 的值大于 0.5，则需减少反应时间（如减少至 5min），或减少样本量（如 20μL），
    则改变后的反应时间 T 和样本量 V1 需代入计算公式重新计算。
    五、结果计算：
    1、按照样本蛋白浓度计算
    酶活定义：每毫克组织蛋白每分钟消耗 1 nmol 的 NADH 定义为一个酶活力单位。
    NADH-GAPDH（nmol/min/mg prot）=[ ΔA÷（ε×d）×V2×109]÷(V1×Cpr) ÷T=193×ΔA÷Cpr
    2、按照样本质量计算
    酶活定义：每克组织每分消耗 1 nmol 的 NADH 定义为一个酶活力单位。
    NADH-GAPDH（nmol/min/g 鲜重）= [ ΔA÷（ε×d）×V2×109]÷(W ×V1÷V) ÷T=193×ΔA÷W
    3、按细菌或细胞密度计算
    酶活定义：每一万个细菌或细胞每分钟消耗 1 nmol 的 NADH 定义为一个酶活力单位。
    NADH-GAPDH（nmol/min/104 cell）＝[ ΔA÷（ε×d）×V2×109]÷(500 ×V1÷V) ÷T=0.39×ΔA
    ε---NADH 摩尔消光系数，6.22×103 L / mol /cm；
    d---比色皿光径，1cm；
    V---加入提取液体积，1mL；
    V1---加入样本体积，0.06mL；
    V2---反应体系总体积，0.72mL=7.2×10-4L；
    T---反应时间，10min；
    W---样本质量，g
    500---细菌或细胞数量，500 万；
    Cpr---样本蛋白质浓度，mg/mL；建议使用本公司的 BCA 蛋白含量检测试剂盒。

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