- ￥1980 - 3490
- wksubio
- WS3480F
- 国内
- 2025年12月09日
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- 详细信息
- 技术资料
- 库存：
大量
- 英文名：
3-Phosphate Glyceraldehyde Dehydrogenase (NADH-GAPDH) Kit
- CAS号：
WS3480F
- 保质期：
3个月
- 供应商：
上海瓦兰生物
- 保存条件：
4℃
- 规格：
24T/48T
| 规格： | 24T | 产品价格： | ￥1980.0 |
|---|---|---|---|
| 规格： | 48T | 产品价格： | ￥3490.0 |
本试剂盒仅供科研使用
3-磷酸甘油醛脱氢酶(NADH-GAPDH)试剂盒说明书
（货号：WS3480F 分光法 48 样）
一、产品简介：
3-磷酸甘油醛脱氢酶分为胞质型和质体型，细胞质中的 3-磷酸甘油醛脱氢酶（EC
1.2.1.12）是糖酵解的中枢环节之一，特异的以 NADH 为辅酶，催化 3 磷酸甘油醛形
成 1,3 二磷酸甘油酸的可逆反应，与糖异生途径及体内血糖浓度的维持、糖尿病的发
生密切相关，在机体糖、脂、蛋白代谢紊乱疾病中发挥重要作用。
本试剂盒耦联 3-磷酸甘油酸激酶，以三磷酸甘油酸为底物，于 340nm 处测定 NADH
的下降速率来得出 NADH-GAPDH 酶活性的大小。
二、试剂盒的组成和配制：
试剂名称
规格
保存要求
备注
提取液
液体 50mL×1 瓶
4℃保存
试剂一
粉剂 mg×1 支
4℃保存
用前甩几下或离心使试剂落入底
部，再加 1.1mL 蒸馏水溶解备用。
试剂二
粉剂 mg×3 支
-20℃保存
用前甩几下或离心使试剂落入底
部，每支加 0.4mL 蒸馏水溶解，用
不完的试剂分装后-20℃保存，禁止
反复冻融，三天内用完。
试剂三
液体μL×1 支
-20℃保存
用前甩几下或离心使试剂落入底
部，再加 1.1mL 蒸馏水溶解备用。
试剂四
液体 30mL×1 瓶
4℃保存
试剂五
粉剂 mg×1 支
4℃保存
用前甩几下或离心使试剂落入底
部，再加 1.1mL 蒸馏水溶解备用。
三、所需的仪器和用品：
紫外分光光度计、1mL 石英比色皿（光径 1cm）、可调式移液器、天平、震荡仪、低
温离心机、研钵。
四、3-磷酸甘油醛脱氢酶(NADH-GAPDH)活性测定：
建议正式实验前选取 2 个样本做预测定，了解本批样品情况，熟悉实验流程，避免实验
样本和试剂浪费！
1、样本制备：
① 组织样本
称取约 0.1g 组织样本，加入 1mL 提取液，冰浴匀浆，12000rpm，4℃离心 10min，
取上清，置冰上待测。
【注】：若增加样本量，可按照组织质量（
g）：提取液体积(mL)为 1：5~10 的比例进行提取。
② 细菌/细胞样本
先收集细菌或细胞到离心管内，离心后弃上清；取约 500 万细菌或细胞加入 1mL 提
取液，超声波破碎（冰浴，功率 200W，超声 3s，间隔 10s，重复 30 次）；12000rpm，
4℃离心 10min，取上清，置冰上待测。
【注】：若增加样本量，可按照细菌或细胞数量（104 个）：提取液体积（mL）为 500~1000：1 的比例提
取
2、上机检测：
① 紫外分光光度计预热 30min，调节波长至 340nm，设定温度 25℃，蒸馏水调零。
② 所有试剂解冻至室温（25℃）。本试剂盒仅供科研使用
2
③ 在 1mL 石英比色皿中依次加入：
试剂名称（μL）
测定管
样本
60
试剂一
20
试剂二
20
试剂三
20
试剂四
600
混匀，室温（25℃）条件下，孵育 10min
试剂五
20
轻轻混匀，室温（25℃）条件下，30s 时于 340nm
处读取吸光值 A1，10min 后再读取 A2，
ΔA=A1-A2。
【注】1.若△A 的值在零附近，可以适当延长反应时间到 20min 后读取 A2，改变后的反应时间
需代入计算公式重新计算。或适当加大样本量(如 100μL，则试剂四相应减少)，则改变
后的加样体积需代入计算公式重新计算。
2. 若下降趋势不稳定，可以每隔 20S 读取一次吸光值，选取一段线性下降的时间段来参与
计算，相对应的 A 值也代入计算公式重新计算。
3. 若起始值 A1 太大如超过 2（如颜色较深的植物叶片，一般色素较高，则起始值相对会
偏高），可以适当减少样本加样量，则改变后的加样体积需代入计算公式重新计算。
或向待测样本中加少许活性炭混匀静置 5min 后 12000rpm, 4℃离心 10min，上清液用于
检测；
4. 若ΔA 的值大于 0.5，则需减少反应时间（如减少至 5min），或减少样本量（如 20μL），
则改变后的反应时间 T 和样本量 V1 需代入计算公式重新计算。
五、结果计算：
1、按照样本蛋白浓度计算
酶活定义：每毫克组织蛋白每分钟消耗 1 nmol 的 NADH 定义为一个酶活力单位。
NADH-GAPDH（nmol/min/mg prot）=[ ΔA÷（ε×d）×V2×109]÷(V1×Cpr) ÷T=193×ΔA÷Cpr
2、按照样本质量计算
酶活定义：每克组织每分消耗 1 nmol 的 NADH 定义为一个酶活力单位。
NADH-GAPDH（nmol/min/g 鲜重）= [ ΔA÷（ε×d）×V2×109]÷(W ×V1÷V) ÷T=193×ΔA÷W
3、按细菌或细胞密度计算
酶活定义：每一万个细菌或细胞每分钟消耗 1 nmol 的 NADH 定义为一个酶活力单位。
NADH-GAPDH（nmol/min/104 cell）＝[ ΔA÷（ε×d）×V2×109]÷(500 ×V1÷V) ÷T=0.39×ΔA
ε---NADH 摩尔消光系数，6.22×103 L / mol /cm；
d---比色皿光径，1cm；
V---加入提取液体积，1mL；
V1---加入样本体积，0.06mL；
V2---反应体系总体积，0.72mL=7.2×10-4L；
T---反应时间，10min；
W---样本质量，g
500---细菌或细胞数量，500 万；
Cpr---样本蛋白质浓度，mg/mL；建议使用本公司的 BCA 蛋白含量检测试剂盒。
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3-磷酸甘油醛脱氢酶(NADH-GAPDH)试剂盒
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