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- 详细信息
- 文献和实验
- 技术资料
- 品系:
细胞株
- 供应商:
上海联祖
- 库存:
20
- 英文名:
NCI-H716
- 生长状态:
悬浮生长,聚团,少数贴壁
- 器官来源:
RPMI1640+10%FBS
- 是否是肿瘤细胞:
否
- 细胞形态:
上皮细胞样
- 规格:
T25瓶
| 产品名称 | 规格 | 货号 |
| NCI-H716细胞 | T25瓶 | LZ-X968328 |
1) 来源:男性 器官: 盲肠 疾病: 结直肠腺癌
2) 形态:上皮细胞,悬浮并部分聚团生长
3) 含量:>1x10^6 细胞数
4) 规格:T25瓶
5) 用途:仅供科研使用。
干冰运输及复苏好存活细胞
(1)1mL冻存管包装干冰运输,收到后-80度冰箱保存过夜后转入液氮或直接复苏,若发现干冰已挥发干净、冻存管瓶盖脱落、破损及细胞有污染,请立即与我们联系。
(2)T25瓶复苏的存活细胞常温发货,收到后按照细胞接收后的处理方法操作。
1) 收到细胞后,75%酒精消毒瓶壁将T25瓶置于37℃培养箱放置约2-3h,若发现培养瓶破损、有液溢出及细胞有污染,请拍照后及时联系我们。
2)请在4或5X显微镜下确认细胞状态,同时给刚收到的细胞拍照(10×,20×)各2-3张以及培养瓶外观照片一张留存,作为售后时收到时细胞状态的依据。
3) 悬浮细胞:T25瓶置于37℃培养箱放置约2-3h,然后抽出瓶中的培养基和细胞1000rpm离心5分钟,弃去上清重悬后接种到新的培养瓶中(加入按照说明书细胞培养条件新配制的完全培养基)。
4)备注:运输用的培养基(灌液培养基)不能再用来培养细胞,请换用按照说明书细胞培养条件新配制的完全培养基来培养细胞。 收到细胞后第一次传代建议T25培养瓶1:2传代 。 一.培养基及培养冻存条件准备:
1) 准备培养基;优质胎牛血清,10%;双抗,1%。备注:该细胞为悬浮并部分聚团生长
2) 培养条件: 气相:空气,95%;二氧化碳,5%。 温度:37摄氏度,培养箱湿度为70%-80%。
3) 冻存液:90%血清,10%DMSO,现用现配。
二. 细胞处理:
1) 冻存细胞的复苏:
将含有1mL细胞悬液的冻存管在37℃水浴中迅速摇晃解冻,加入到含4-6mL完全培养基的离心管中混合均匀。在1000RPM条件下离心3-5min,弃去上清液,完全培养基重悬细胞。然后将细胞悬液加入含6-8ml完全培养基的培养瓶(或皿)中37℃培养过夜。第二天显微镜下观察细胞生长情况和细胞密度。
2) 细胞传代:如果细胞密度达80%-90%,即可进行传代培养。
对于悬浮细胞,传代可参考以下方法:
悬浮状态下生长的细胞,可以通过向培养瓶中添加完全培养基来维持细胞的生长状态,一般情况下细胞密度维持在1×105~1×10^6个/mL(不同细胞对密度要求不同,)可以维持细胞的正常生长。如需分瓶可以将细胞悬液收集到离心管中1000rpm,离心5min,弃去上清,补加1-2mL培养液后重悬混匀后将细胞悬液按1:2的比例分到新T25瓶中,添加6-8ml按照说明书要求配置的新的完全培养基以保持细胞的生长活力,后续传代根据实际情况按1:2~1:5的比例进行。
3) 细胞冻存: 收到细胞后建议在培养前3代时冻存一批细胞种子以备后续实验使用。
下面T25瓶为例;
1. 细胞冻存时按照细胞传代的过程收集消化好的细胞到离心管中,可使用血球计数板计数,来决定细胞的冻存密度。一般细胞的推荐冻存密度为1×10^6~1×107个活细胞/ml.
2. 1000rpm离心3-5min,去掉上清。用配制好的细胞冻存液重悬细胞 ,按每1ml冻存液含1×10^6~1×107个活细胞/ml分配到一个冻存管中将细胞分配到冻存管中,标注好名称、代数、日期等信息。
3. 将要冻存的细胞置于程序降温盒中,-80度冰箱中过夜,之后转入液氮容器中储存。同时记录好冻存管在液氮容器中的位置以便后续查阅和使用。
| 结肠癌细胞;HCT-15 | 台盼蓝染色细胞存活率检测试剂盒 | 4香豆酸:辅酶A连接酶(4CL)测试盒 |
| 结肠癌细胞;HCT-116 | 中性红细胞增殖及细胞毒性检测试剂盒 | 4香豆酸:辅酶A连接酶(4CL)测试盒 |
| 结肠癌细胞(低分化);RKO | 细胞毒性检测试剂盒(乳酸脱氢酶法) | 6磷酸葡萄糖酸脱氢酶(6PGDH)测试盒 |
| 小细胞肺癌细胞;NCI-H446 | 细胞增殖及细胞毒性检测试剂盒(WST-1法) | 6磷酸葡萄糖酸脱氢酶(6PGDH)测试盒 |
| 肺鳞癌细胞;SK-MES-1 | CCK-8细胞增殖与毒性检测试剂盒(WST-8法) | 6磷酸葡萄糖脱氢酶(G6PDH)/葡萄糖6磷酸脱氢酶测试盒 |
| 肺鳞癌细胞;NCI-H226 | 增强型CCK-8试剂盒 | 6磷酸葡萄糖脱氢酶(G6PDH)/葡萄糖6磷酸脱氢酶测试盒 |
| 肺癌细胞;NCI-H1755 | 细胞周期与细胞凋亡检测试剂盒 | ADPG焦磷酸化酶(AGP)测试盒 |
| 肺癌细胞;A549 | 细胞凋亡与坏死检测试剂盒 | ADPG焦磷酸化酶(AGP)测试盒 |
| 非小细胞肺癌细胞;NCI-H358 | Annexin V-FITC细胞凋亡检测试剂盒 | ADPG焦磷酸化酶(AGP)测试盒 |
| 非小细胞肺癌细胞;NCI-H1650 | Annexin V-PE细胞凋亡检测试剂盒 | ADP含量测试盒 |
| 非小细胞肺癌细胞;HCC827 | Annexin V-EGFP细胞凋亡检测试剂盒 | AMP含量测试盒 |
| 大细胞肺癌细胞;NCI-H661 | TUNEL检测阳性对照制备试剂盒 | ATP含量测试盒 |
| 大细胞肺癌细胞;NCI-H460 | 一步法TUNEL细胞凋亡检测试剂盒(绿色荧光) | ATP含量测试盒 |
| 肝癌细胞;SNU-475 | 一步法TUNEL细胞凋亡检测试剂盒(红色荧光) | ATP含量测试盒 |
| 肝癌细胞;SNU-398 | TUNEL细胞凋亡检测试剂盒(显色法) | ATP柠檬酸裂解酶(ACL)测试盒 |
| 肝癌细胞;SNU-387 | Caspase 1 活性检测试剂盒 | ATP柠檬酸裂解酶(ACL)测试盒 |
| 肝癌细胞;SNU-182 | Caspase 2 活性检测试剂盒 | BCA蛋白法含量测试盒 |
| 肝癌细胞;SK-HEP-1 | Caspase 3 活性检测试剂盒 | BCA蛋白法含量测试盒 |
| 肝癌细胞;QGY-7703 | Caspase 4 活性检测试剂盒 | Ca++Mg++ ——ATP酶测试盒 |
| 肝癌细胞;HuH-7 | Caspase 6 活性检测试剂盒 | Ca++Mg++ ——ATP酶测试盒 |
| 肝癌细胞;HepG2 | Caspase 8 活性检测试剂盒 | H2S含量测试盒 |
| NCI-H716细胞肺腺鳞癌细胞 | Caspase 9 活性检测试剂盒 | H2S含量测试盒 |
| 肺腺癌细胞;NCI-H441 | Caspase抑制剂(Z-VAD-FMK) | L半乳糖酸1,4内酯脱氢酶(Gal LDH)测试盒 |
| 肺腺癌细胞;NCI-H292 | Caspase 3抑制剂(Ac-DEVD-CHO) | L半乳糖酸1,4内酯脱氢酶(Gal LDH)测试盒 |
| 肺腺癌细胞;NCI-H1975 | 线粒体膜电位检测试剂盒 | Na+k+ ——ATP酶测试盒 |
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文献和实验都是贴壁细胞,在消化传代过程中,步骤如下:倒尽旧的培养液->用无血清的培养基清洗一两次->加入一定量的胰酶,置于37度培养箱中5--10分钟,使细胞悬浮->显微镜下观察,待细胞大部分变圆时,回到超静台->加入一定量的含血清的新培养液,以终止胰酶作用->反复吹打细胞->再置显微镜下观察,直到细胞全部悬浮起来->吸出一部分加入新的培养瓶中->最后再补充加入一定量新的培养液。注意: 1、吹细胞时尽量多吹边角儿,此处细胞生长的多。2、吸出细胞前要混匀,可以剧烈震荡培养瓶。3、我们用的是DMEM
一、实验材料NCI-H1299,购自上海晶莱生物技术有限公司。表 2.1.1 主要试剂试剂与耗材厂家(货号)细胞培养瓶FALCON 中国(353014)Penicillin/streptomycin solution(KGY002)0.25% Tripsin-EDTA(BK-E3076)PBS(BK330-2)胎牛血清GIBCO 美国(10270-106)1640 培养基Hyclone 美国(SH3080901)Annexin V-FITC/PI 凋亡试剂盒 二、实验仪器表 2.2.1 主要
potential loss and cell cycle arrest》的论文。文章了评估 epicatechin 对 NCI-H2172 非小型细胞肺癌细胞的抗癌作用,重点观测其对自噬细胞死亡、线粒体膜电位 (m) 丧失和细胞周期阻滞的影响。图片来源于 Molecular Medicine Reports 官网然而,就在发表后的第二天,PubPeer 网站上的匿名网友指出,文章 Fig4 中的多个细胞为复制细胞。匿名网友指出,相同颜色圈出的细胞是相同的细胞。图片来源于 PubPeer 官网,相同圈中细胞
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