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- WS6380F
- 国内
- 2025年10月27日
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- 详细信息
- 文献和实验
- 技术资料
- 库存：
大量
- 英文名：
Pyruvate Dehydrogenase (PDH) Kit
- CAS号：
WS6380F
- 保质期：
3个月
- 供应商：
上海瓦兰生物
- 保存条件：
4℃
- 规格：
48T
本试剂盒仅供科研使用
*酮酸脱氢酶（Pyruvate dehydrogenase，PDH）试剂盒说明书
（货号：WS6380F 分光法 48 样）
一、产品简介：
丙*酸脱氢酶（PDH，EC 1.2.4.1）广泛存在于动物、植物、微生物和培养细胞中，
是丙*酸脱氢酶复合体(PDHC)催化丙*酸氧化脱羧的限速酶，把糖酵解和三羧酸循环连
接起来。
丙*酸脱氢酶（PDH）催化底物*酮酸钠生成羟乙基-TPP，在电子传递体（PMS）
存在下，使噻唑蓝（MTT）还原生成蓝色产物，通过检测该蓝色产物在 566nm 处的增
加速率，即可得出 PDH 酶活性大小。
二、试剂盒的组成和配制：
试剂名称
规格
保存要求
备注
试剂一
液体 50mL×1 瓶
-20℃保存
试剂二
液体 10mL×1 瓶
-20℃保存
试剂三
液体μL×1 支
-20℃保存
试剂四
粉剂 mg×2 支
4℃保存
用前甩几下使试剂落入底部，
每支加 1.2mL 的蒸馏水溶解。
试剂五
粉剂 mg×4 支
4℃避光保存
用前甩几下使试剂落入底部，
每支加 0.6mL 的蒸馏水溶解。
一天内用完。
试剂六
粉剂 mg×2 支
4℃避光保存
用前甩几下使试剂落入底部，
每支加 1.2mL 的蒸馏水溶解。
一周内用完。
试剂七
液体 32mL×1 瓶
4℃保存
三、所需的仪器和用品：
可见分光光度计、1mL 玻璃比色皿（光径 1cm）、水浴锅、台式离心机、可调式移液
器、研钵、冰和蒸馏水。
四、丙*酸脱氢酶（PDH）活性测定：
1、线粒体制备（提示：整个线粒体的提取过程须保持 4℃低温环境）：
① 称取约 0.1g 组织或收集 500 万细菌/细胞，加入 1mL 试剂一，用冰浴匀浆器或研钵匀
浆，转移至离心管后于 4℃×700g 离心 10min。
② 弃沉淀，上清液移至另一离心管中，4℃×12000g 离心 10min。用移液器移除上清液(上
清液即胞浆提取物，可用于测定从线粒体泄漏的酶活性（此步可选做）)，留下沉淀
（沉淀即为线粒体）。
③ 在沉淀（线粒体）中加入200μL试剂二和2μL试剂三，超声波破碎（冰浴，功率20％或
200W，超声3s，间隔10秒，重复30次），液体置于冰上用于*酮酸脱氢酶活性测定。
【注】：若增加样本量，可按照组织质量（
g）：提取液体积(mL)为 1：5~10 的比例进行提取，或按照细
菌/细胞数量（104）：提取液（mL）为 500~1000：1 的比例进行提取。
2、上机检测：
① 可见分光光度计预热 30min 以上，调节波长至 566nm，蒸馏水调零。
② 所有试剂解冻至室温（25℃）。
③ 在 1mL 玻璃比色皿（光径 1cm）中依次加入：本试剂盒仅供科研使用
2
五、结果计算：
1、按样本蛋白浓度计算：
酶活定义：每毫克组织蛋白每分钟还原 1 nmol 噻唑蓝（MTT）定义为一个酶活性单位。
PDH 活性(nmol/min/mg prot)=[ΔA×V2÷(ε×d)×109]÷(V1×Cpr)÷T=107.2×ΔA÷Cpr
2、按样本鲜重计算：
酶活定义：每克组织每分钟还原 1 nmol 噻唑蓝（MTT）定义为一个酶活性单位。
PDH 活性(nmol/min/g 鲜重)=[ΔA×V2÷(ε×d)×109]÷(W×V1÷V)÷T=21.7×ΔA÷W
3、按细菌或细胞密度计算：
酶活定义：每 1 万个细菌或细胞每分钟还原 1 nmol 噻唑蓝（MTT）定义为一个酶活单位。
PDH 活性(nmol/min /104 cell)=[ΔA×V2÷(ε×d)×109]÷(500×V1÷V)÷T=0.044×ΔA
ε---还原型 MTT 的摩尔消光系数，1.865×104 L/mol/cm；
d---96 孔板光径，0.5cm；
V---加入提取液体积，0.202mL；
V1---加入样本体积，0.01 mL；
V2---反应体系总体积，2×10-4 L；
T---反应时间，20min；
W---样本质量，g；
500---细菌或细胞总数，500 万；
Cpr---样本蛋白质浓度，mg/mL；建议使用本公司的 BCA 蛋白含量检测试剂盒。
试剂名称（
μL）
测定管
样本
40
试剂四
40
试剂五
40
试剂六
40
试剂七
640
混匀，30℃下，10s 时于 566nm 处读取吸光
值 A1，10min 后读取吸光值 A2，
△A=（A2-A1）测定管-（A2-A1）对照管。
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文献和实验相关实验
的批间差异也常因动物的个体和采血时间而异，且又是一种半定量的人工操作试验，迄今难以令人满意。1995年日本学者Yamamoto等创建一种脂质体均相免疫溶破试验，用于血清总补体活性测定。并由Wako公司研制成诊断试剂盒，包括两种试剂：试剂1为脂质体，它是由一个极性部分（磷脂中的胆碱）和一个非极性部分（磷脂中的烷基）组成的封闭性颗粒。在脂质体的内部水相中包入水溶性的葡萄糖-6-磷酸脱氢酶（G-6-PDH）；在其脂质体双层内包裹抗原——二硝基苯酚（DNP）。试剂2为羊抗DNP抗体和酶底物——24mmol
，那么你可以尝试利用温度诱导的载体，如：pDH2。它利用PL启动子，在温度上升到42℃后进行诱导表达。 可以看到在所有启动子里属T7启动子最强，它可以将大肠杆菌的资源最大程度地调用过来表达外源蛋白。这样一些难表达的蛋白都可以在pET系统里面表达出来，但是是不是越强就越好呢?如果你需要表达蛋白是可溶的，那么T7启动子就不那么适合了。较弱的启动子转录速度较慢，这样对于表达可溶、稳定、完整的蛋白比较有利。 Novagen可以说是的pET系统是最王牌的T7启动子表达系统，可是当T7启动子的强
丙tong酸脱氢酶(PDH)试剂盒
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