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丙tong酸脱氢酶(PDH)试剂盒

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  • ￥770
  • wksubio
  • WS6380F
  • 国内
  • 2025年10月27日
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    • 英文名：

      Pyruvate Dehydrogenase (PDH) Kit

    • CAS号：

      WS6380F

    • 保质期：

      3个月

    • 供应商：

      上海瓦兰生物

    • 保存条件：

      4℃

    • 规格：

      48T

    本试剂盒仅供科研使用
    *酮酸脱氢酶（Pyruvate dehydrogenase，PDH）试剂盒说明书
    （货号：WS6380F 分光法 48 样）
    一、产品简介：
    丙*酸脱氢酶（PDH，EC 1.2.4.1）广泛存在于动物、植物、微生物和培养细胞中，
    是丙*酸脱氢酶复合体(PDHC)催化丙*酸氧化脱羧的限速酶，把糖酵解和三羧酸循环连
    接起来。
    丙*酸脱氢酶（PDH）催化底物*酮酸钠生成羟乙基-TPP，在电子传递体（PMS）
    存在下，使噻唑蓝（MTT）还原生成蓝色产物，通过检测该蓝色产物在 566nm 处的增
    加速率，即可得出 PDH 酶活性大小。
    二、试剂盒的组成和配制：
    试剂名称
    规格
    保存要求
    备注
    试剂一
    液体 50mL×1 瓶
    -20℃保存
    试剂二
    液体 10mL×1 瓶
    -20℃保存
    试剂三
    液体μL×1 支
    -20℃保存
    试剂四
    粉剂 mg×2 支
    4℃保存
    用前甩几下使试剂落入底部，
    每支加 1.2mL 的蒸馏水溶解。
    试剂五
    粉剂 mg×4 支
    4℃避光保存
    用前甩几下使试剂落入底部，
    每支加 0.6mL 的蒸馏水溶解。
    一天内用完。
    试剂六
    粉剂 mg×2 支
    4℃避光保存
    用前甩几下使试剂落入底部，
    每支加 1.2mL 的蒸馏水溶解。
    一周内用完。
    试剂七
    液体 32mL×1 瓶
    4℃保存
    三、所需的仪器和用品：
    可见分光光度计、1mL 玻璃比色皿（光径 1cm）、水浴锅、台式离心机、可调式移液
    器、研钵、冰和蒸馏水。
    四、丙*酸脱氢酶（PDH）活性测定：
    1、线粒体制备（提示：整个线粒体的提取过程须保持 4℃低温环境）：
    ① 称取约 0.1g 组织或收集 500 万细菌/细胞，加入 1mL 试剂一，用冰浴匀浆器或研钵匀
    浆，转移至离心管后于 4℃×700g 离心 10min。
    ② 弃沉淀，上清液移至另一离心管中，4℃×12000g 离心 10min。用移液器移除上清液(上
    清液即胞浆提取物，可用于测定从线粒体泄漏的酶活性（此步可选做）)，留下沉淀
    （沉淀即为线粒体）。
    ③ 在沉淀（线粒体）中加入200μL试剂二和2μL试剂三，超声波破碎（冰浴，功率20％或
    200W，超声3s，间隔10秒，重复30次），液体置于冰上用于*酮酸脱氢酶活性测定。
    【注】：若增加样本量，可按照组织质量（
    g）：提取液体积(mL)为 1：5~10 的比例进行提取，或按照细
    菌/细胞数量（104）：提取液（mL）为 500~1000：1 的比例进行提取。
    2、上机检测：
    ① 可见分光光度计预热 30min 以上，调节波长至 566nm，蒸馏水调零。
    ② 所有试剂解冻至室温（25℃）。
    ③ 在 1mL 玻璃比色皿（光径 1cm）中依次加入：本试剂盒仅供科研使用
    2
    五、结果计算：
    1、按样本蛋白浓度计算：
    酶活定义：每毫克组织蛋白每分钟还原 1 nmol 噻唑蓝（MTT）定义为一个酶活性单位。
    PDH 活性(nmol/min/mg prot)=[ΔA×V2÷(ε×d)×109]÷(V1×Cpr)÷T=107.2×ΔA÷Cpr
    2、按样本鲜重计算：
    酶活定义：每克组织每分钟还原 1 nmol 噻唑蓝（MTT）定义为一个酶活性单位。
    PDH 活性(nmol/min/g 鲜重)=[ΔA×V2÷(ε×d)×109]÷(W×V1÷V)÷T=21.7×ΔA÷W
    3、按细菌或细胞密度计算：
    酶活定义：每 1 万个细菌或细胞每分钟还原 1 nmol 噻唑蓝（MTT）定义为一个酶活单位。
    PDH 活性(nmol/min /104 cell)=[ΔA×V2÷(ε×d)×109]÷(500×V1÷V)÷T=0.044×ΔA
    ε---还原型 MTT 的摩尔消光系数，1.865×104 L/mol/cm；
    d---96 孔板光径，0.5cm；
    V---加入提取液体积，0.202mL；
    V1---加入样本体积，0.01 mL；
    V2---反应体系总体积，2×10-4 L；
    T---反应时间，20min；
    W---样本质量，g；
    500---细菌或细胞总数，500 万；
    Cpr---样本蛋白质浓度，mg/mL；建议使用本公司的 BCA 蛋白含量检测试剂盒。
    试剂名称（
    μL）
    测定管
    样本
    40
    试剂四
    40
    试剂五
    40
    试剂六
    40
    试剂七
    640
    混匀，30℃下，10s 时于 566nm 处读取吸光
    值 A1，10min 后读取吸光值 A2，
    △A=（A2-A1）测定管-（A2-A1）对照管。

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