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柠檬酸(CA)含量试剂盒,微板法

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  • ￥670
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  • WS4680W
  • 国内
  • 2026年01月15日
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    • 英文名：

      Citric acid (CA) content test kit

    • CAS号：

      WS4680W

    • 保质期：

      3个月

    • 供应商：

      上海瓦兰生物

    • 保存条件：

      4℃

    • 规格：

      96T

    本试剂盒仅供科研使用
    柠檬酸（citric acid, CA）含量测定试剂盒说明书
    （货号：WS4680W 微板法 96 样）
    一、产品简介：
    柠檬酸广泛用于食品、医药与工业中。同时柠檬酸(CA)也是三羧酸循环第一步反应
    的产物，参与呼吸代谢等生理代谢活动。
    铁（III）
    -磺基水杨酸生成紫红色络合物，柠檬酸可使该络合物颜色褪至橙红。于 470nm
    波长下，其吸光度的减小与柠檬酸含量在一定条件下呈正比，从而可求得样品中柠檬酸含量
    二、试剂盒的组成和配制：
    三、所需的仪器和用品：
    酶标仪、96 孔板、低温离心机、可调式移液枪、研钵、冰和蒸馏水。
    四、柠檬酸（CA）含量测定：
    建议正式实验前选取 2 个样本做预测定，了解本批样品情况，熟悉实验流程，避免实验
    样本和试剂浪费！
    1、样本制备：
    ① 组织样本：
    称取约 0.1g 组织，加入 1mL 提取液，进行冰浴匀浆。12000g，4℃离心 10min，取上
    清置冰上待测。
    【注】：若增加样本量，可按照组织质量（
    g）：提取液体积(mL)为 1：5~10 的比例提取
    ② 细菌、真菌样本：
    先收集细菌或细胞到离心管内，离心后弃上清；取 500 万细菌或细胞加入 1mL 提取液；
    冰浴超声波破碎细菌或细胞（功率 300w，超声 3 秒，间隔 7 秒，总时间 3min）；12000g，
    4℃离心 10min，取上清置冰上待测。
    【注】：若增加样本量，可按照细菌或细胞数量（104 个）：提取液体积（mL）为 1000~5000：1 的比
    例进行提取
    ③ 液体样本：直接检测。若浑浊，离心后取上清检测。
    2、上机检测：
    ① 酶标仪预热 30 min，调节波长到 470 nm。
    ② 在 96 孔板中依次加入：
    试剂名称（
    μL）
    测定管
    空白管（仅做一次）
    试剂一
    10
    10
    试剂二
    40
    40
    提取液
    40
    40
    样本
    10
    试剂名称
    规格
    保存要求
    备注
    提取液
    液体120mL×1瓶
    4℃保存
    试剂一
    粉剂 mg×2 支
    4℃保存
    临用前每支甩几下或离心使试剂落
    入底部，再分别加 1mL 蒸馏水溶解
    备用，现配现用。
    试剂二
    粉剂 mg×1 瓶
    4℃保存
    临用前甩几下使试剂落入底部，再
    加 5mL 蒸馏水溶解备用。
    标准品
    粉剂 mg×1 支
    4℃保存
    若重新做标曲，则用到该试剂本试剂盒仅供科研使用
    2
    蒸馏水
    100
    110
    混匀，室温（25℃）条件下孵育 20min，于 470nm 处读
    取吸光值 A，△A=A 空白-A 测定。
    【注】1. 若 A 测定管值在零附近或者 A 测定最后的颜色接近无色，表明样本中柠檬酸含量较高，
    可对样本用蒸馏水稀释后再检测，则稀释倍数 D 需代入公式重新检测。
    2. 若 A 测定管接近空白管或△A 值在零附近，可增加样本加样体积 V1（如增至 50μL，
    则提取液或蒸馏水相应减少）。
    五、结果计算：
    1、 标准曲线：y = 0.4517x + 0.0005；x 是标准品浓度（mg/mL），y 是ΔA。
    2、按组织质量计算：
    柠檬酸含量(mg/g 鲜重)=[(ΔA-0.0005)÷0.4517×V1]÷(W×V1÷V)×D
    =2.2×(ΔA-0.0005)÷W×D
    3. 按细胞数量计算：
    柠檬酸含量(mg/104 cell)=[(ΔA-0.0005)÷0.4517×V1] ÷(500×V1÷V)×D
    =0.0044×(ΔA-0.0005)×D
    4、按液体体积计算：
    柠檬酸含量(mg/mL)=[(ΔA-0.0005)÷0.4517×V1] ÷V1×D=2.2×(ΔA-0.0005)×D
    V---加入提取液体积，1 mL；
    V1---加入样本体积，0.01mL；
    W---样本质量，g；
    500---细胞或细菌总数；500 万；
    D---稀释倍数，未稀释即为 1。
    附：标准曲线制作过程：
    1 制备标准品母液（1mg/mL）：向标准品 EP 管里面加入 1mL 蒸馏水（母液需在两天
    内用且-20℃保存）。
    2 把母液稀释成六个浓度梯度的标准品：0, 0.2, 0.4, 0.6, 0.8, 1. mg/mL。也可根据实际
    样本来调整标准品浓度。
    3 依据测定管的加样表操作，根据结果即可制作标准曲线。

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