本试剂盒仅供科研使用
柠檬酸合酶（citrate synthase，CS）试剂盒说明书
（货号：WS4380F 分光法 24 样）
一、产品简介：
柠檬酸合酶（CS，EC 2.3.3.1）几乎存在于所有的生物体中，是细胞内多种代谢途径的
关键限速酶及代谢变化的标志酶，是发生于线粒体中 TCA 循环入口的第一个限速酶，也
与种子萌发和抗逆等有关。
柠檬酸合酶（CS）催化乙酰 CoA 和草酰乙酸产生柠檬酰辅酶 A，进一步水解成柠檬
酸；进一步与显色剂作用生成黄色物质，该有色物质在 412nm 处有特征吸收峰，即可得
出 CS 酶活性大小。
二、试剂盒组成和配制：
试剂名称
规格
保存要求
备注
提取液
液体 100mL×1 瓶
4℃保存
试剂一
液体 32mL×1 瓶
4℃保存
试剂二
液体 4mL×1 支
4℃保存
试剂三
粉剂 mg×1 支
4℃保存
临用前甩几下使粉剂落入底部，
再加入 0.55mL 蒸馏水溶解备用，
试剂四
粉剂 mg×1 支
4℃保存
临用前甩几下使粉剂落入底部，
再加入 0.7mL 蒸馏水溶解备用，
标准品
粉剂 mg×1 支
4℃保存
若重新做标曲，则用到该试剂
三、所需的仪器和用品：
可见分光光度计、1mL 玻璃比色皿（光径 1cm）、低温离心机、水浴锅、可调式移液器、
研钵、冰和蒸馏水
四、柠檬酸合酶（CS）活性测定：
建议正式实验前选取 2 个样本做预测定，了解本批样品情况，熟悉实验流程，避免实验
样本和试剂浪费！
1、样本制备：
① 组织样本：
称取约 0.1g 组织，加入 1mL 提取液，进行冰浴匀浆。12000rpm 4℃离心 15min，取上
清，置冰上待测。
【注】：若增加样本量，可按照组织质量（
g）：提取液体积(mL)为 1：5~10 的比例提取
② 细菌/细胞样本：
先收集细菌或细胞到离心管内，离心后弃上清；取约 500 万细菌或细胞加入 1mL 提取
液，超声波破碎细菌或细胞（冰浴，功率 20％或 200W，超声 3s，间隔 10s，重复 30 次）；
12000rpm 4℃离心 15min，取上清，置冰上待测。
【注】：若增加样本量，可按照细菌/细胞数量（104）：提取液（mL）为 500~1000：1 的比例进行提取。
2、上机检测：
① 分光光度计预热 30min 以上，调节波长至 412nm，蒸馏水调零。
② 所有试剂解冻至室温（25℃）
③ 在 1mL 玻璃比色皿中依次加入：
试剂名称（
μL）
测定管
对照管
样本
80
80
试剂一
600
640本试剂盒仅供科研使用
2
试剂二
80
80
试剂三
20
试剂四
20
混匀，30℃条件下反应 15min，立即于 412nm 处读取吸光
值 A，ΔA=A 测定-A 对照（每个样本做一个自身对照）。
【注】：若ΔA 过小，可以延长反应时间（如：60min 或更长），或增加样本量（如 120μL，则试
剂一相应减少）。调整后的反应时间 T 或样本体积 V1 需代入计算公式重新计算。
五、结果计算：
1、标准曲线方程：y = 0.016x - 0.0009，x 是标准品摩尔质量：nmol，y 是ΔA。
2、按样本蛋白浓度计算：
酶活定义：每毫克组织蛋白每分钟催化产生 1 nmol 辅酶 A 定义为一个酶活力单位。
CS(nmol/min /mg prot)=[(ΔA+0.001)÷0.016]÷(V1×Cpr)÷T=52.08×(ΔA+0.001)÷Cpr
3、按样本鲜重计算：
酶活定义：每克组织每分钟催化产生 1nmol 辅酶 A 定义为一个酶活力单位。
CS(nmol/min /g 鲜重)=[(ΔA+0.001)÷0.016]÷(W ×V1÷V)÷T=52.08×(ΔA+0.001)÷W
4 按细菌或细胞密度计算：
酶活定义：每 1 万个细菌或细胞每分钟催化产生 1 nmol TNB 定义为一个酶活力单位。
CS(nmol/min /104 cell)=[(ΔA+0.001)÷0.016]÷(500×V1÷V)÷T=0.104×(ΔA+0.001)
V1---加入样本体积，0.08mL； V---加入提取液体积，1mL； T---反应时间，15 min；
W---样本质量，g；
500---细胞或细菌总数，500 万；
Cpr---样本蛋白质浓度，mg/mL；建议使用本公司的 BCA 蛋白含量检测试剂盒。
附：标准曲线制作过程：
1 制备标准品母液（1μmol/mL）：用 5mL 蒸馏水溶解标准品（母液需在两天内用且-20℃
保存）。
2 把母液稀释成六个浓度梯度的标准品：0, 0.1, 0.2, 0.3, 0.4, 0.5. μmol/mL。也可根据实
际样本来调整标准品浓度。
3 依据测定管加样表操作，80μL 标准品+640μL 试剂一+80μL 试剂二，根据结果即可
制作标准曲线。
文献和实验
