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细胞质异柠檬酸脱氢酶(NADP-IDH)试剂盒,微板法

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  • ￥580
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  • WS2380W
  • 国内
  • 2025年08月07日
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    • 英文名：

      Cytoplasmic isocitrate dehydrogenase (NADP-IDH) kit

    • CAS号：

      WS2380W

    • 保质期：

      3个月

    • 供应商：

      上海瓦兰生物

    • 保存条件：

      4℃

    • 规格：

      96T

    本试剂盒仅供科研使用
    细胞质异柠檬酸脱氢酶(NADP-IDH)试剂盒说明书
    （货号：WS2380W 微板法 96 样）
    一、产品简介：
    细胞质异柠檬酸脱氢酶即 NADP-异柠檬酸脱氢酶（NADP-IDH，EC 1.1.1.42）普遍存在
    于真核及原核生物体内。是细胞质中除了磷酸戊糖途径外又一种 NADPH 来源的重要途
    径，在逆境中该酶活性通常会发生显著变化。
    本试剂盒提供一种简单，灵敏，快速的测定方法：利用 NADP-IDH 催化 NADP+产生
    NADPH，接着与特异的显色剂反应，产生在 450nm 处有最大吸收峰的有色物质，通过
    检测该有色物质在 450nm 的增加速率，进而计算出 NADP-IDH 酶活性的大小。
    二、试剂盒组成和配制：
    试剂名称
    规格
    保存要求
    备注
    提取液
    液体 100mL×1 瓶
    4℃保存
    试剂一
    液体 15mL×1 瓶
    4℃保存
    试剂二
    粉剂 mg×1 支
    4℃保存
    临用前甩几下使粉剂落入底部，再
    加入 2.2mL 蒸馏水溶解备用。
    试剂三
    粉剂 mg×1 支
    4℃保存
    临用前甩几下使粉剂落入底部，再
    加入 3.2mL 蒸馏水溶解备用。
    试剂四
    液体 1mL×1 支
    4℃保存
    标准品
    粉剂 mg×1 支
    4℃保存
    若重新做标曲，则用到该试剂。
    三、所需的仪器和用品：
    酶标仪、96 孔板、低温离心机、可调式移液器、、研钵、冰和蒸馏水。
    四、NADP-异柠檬酸脱氢酶（NADP-IDH）活性测定：
    建议正式实验前选取 2 个样本做预测定，了解本批样品情况，熟悉实验流程，避免实验
    样本和试剂浪费！
    1、样本制备：
    ① 组织样本：
    称取约 0.1g 组织，加入 1mL 提取液，进行冰浴匀浆。12000rpm 4℃离心 15min，取上
    清，置冰上待测。
    【注】：若增加样本量，可按照组织质量（
    g）：提取液体积(mL)为 1：5~10 的比例提取
    ② 细菌/细胞样本：
    先收集细菌或细胞到离心管内，离心后弃上清；取约 500 万细菌或细胞加入 1mL 提取
    液，超声波破碎细菌或细胞（冰浴，功率 20％或 200W，超声 3s，间隔 10s，重复 30 次）；
    12000rpm 4℃离心 15min，取上清，置冰上待测。
    【注】：若增加样本量，可按照细菌/细胞数量（104）：提取液（mL）为 500~1000：1 的比例进行提取。
    2、上机检测：
    ① 酶标仪预热 30min 以上，调节波长至 450nm。
    ② 所有试剂解冻至室温（25℃），在 96 孔板中依次加入：
    试剂名称（
    μL）
    测定管
    样本
    10
    试剂一
    130
    试剂二
    20
    试剂三
    30本试剂盒仅供科研使用
    2
    试剂四
    10
    混匀，37℃条件下，3min 时于 450nm 处读取 A1 值，避
    光反应 30min 后读取 A2 值，ΔA=A2-A1。
    【注】：若ΔA 过小，可以延长反应时间（如：60min 或更长），或增加样本量（如 30μL，则试
    剂一相应减少）。调整后的反应时间 T 或样本体积 V1 需代入计算公式重新计算。
    五、结果计算：
    1、标准曲线方程：y = 0.0807x - 0.0024，x 是 NADPH 摩尔质量：nmol，y 是ΔA。
    2、按样本蛋白浓度计算：
    酶活定义：每毫克组织蛋白每分钟生成 1 nmol 的 NADPH 定义为一个酶活力单位。
    NADP-IDH(nmol/min/mg prot)=[(ΔA+0.0024)÷0.0807]÷(V1×Cpr)÷T
    =41.3×(ΔA+0.0024)÷Cpr
    3、按样本鲜重计算：
    酶活定义：每克组织每分钟生成 1 nmol 的 NADPH 定义为一个酶活力单位。
    NADP-IDH(nmol/min/g 鲜重)=[(ΔA+0.0024)÷0.0807]÷(W×V1÷V)÷T
    =41.3×(ΔA+0.0024)÷W
    4、按细菌或细胞密度计算：
    酶活定义：每 1 万个细菌或细胞每分钟生成 1 nmol 的 NADPH 定义为一个酶活力单位。
    NADP-IDH(nmol/min/104)=[(ΔA+0.0024)÷0.0807]÷(500×V1÷V)÷T=0.083×(ΔA+0.0024)
    V---加入提取液体积，1 mL；
    V1---加入样本体积，0.01 mL；
    W---样本质量，g。
    500---细菌或细胞总数，万。
    T---反应时间，30 min；若加大了反应时间，则重新调整的反应时间值要代入公式重新计算；
    Cpr---样本蛋白质浓度，mg/mL；建议使用本公司的 BCA 蛋白含量检测试剂盒。
    附：标准曲线制作过程：
    1 制备标准品母液（1nmol/μL）：向标准品 EP 管里面加入 0.6mL 蒸馏水（母液需在两
    天内用且-20℃保存）。
    2 把母液稀释成六个浓度梯度的标准品：0, 0.2, 0.4, 0.6, 0.8, 1. nmol/μL。也可根据实际
    样本来调整标准品浓度。
    3 依据加样表操作，根据结果即可制作标准曲线。

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