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乙醇酸氧化酶(GO)试剂盒,微板法

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  • ￥920
  • wksubio
  • WS0160W
  • 国内
  • 2025年12月22日
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    • 英文名：

      Glycolic Acid Oxidase (GO) Kit

    • CAS号：

      WS0160W

    • 保质期：

      3个月

    • 供应商：

      上海瓦兰生物

    • 保存条件：

      4℃

    • 规格：

      96T

    本试剂盒仅供科研使用
    乙醇酸氧化酶活性测定试剂盒说明书
    （货号：WS0160W 微板法 96 样）
    一、产品简介：
    乙醇酸氧化酶（GO，EC 1.3.3.1）是植物光呼吸过程中的关键酶，它催化乙醇酸氧化生
    成乙醛酸，即植物光呼吸的底物。乙醇酸氧化酶与植物光呼吸、生长发育、矿质营养及感
    病等密切相关。
    乙醇酸氧化酶催化乙醇酸氧化成乙醛酸，生成的乙醛酸与苯*反应生成乙醛酸苯腙。乙
    醛酸苯腙 324nm 处有最大吸收峰，通过测定乙醛酸苯腙的增加量，即可得出乙醇酸氧化
    酶的酶活大小。
    二、测试盒组成和配制：
    三、所需的仪器和用品：
    酶标仪、96 孔板（UV 板）、低温离心机、可调式移液器、研钵、冰和蒸馏水。
    四、乙醇酸氧化酶(GO)活性测定：
    建议正式实验前选取 2 个样本做预测定，了解本批样品情况，熟悉实验流程，避免实验
    样本和试剂浪费！
    1、样本制备：
    称取约 0.1g 组织，加入 1mL 提取液，进行冰浴匀浆。4℃×12000rpm 离心 10min，取上
    清，置冰上待测。
    【注】：若增加样本量，可按照组织质量（
    g）：提取液体积(mL)为 1：5~10 的比例进行提取。
    2、上机检测：
    ① 酶标仪预热 30 min 以上，调节波长到 324nm。
    ② 所有试剂解冻至室温（25℃）。
    ③ 为了减少操作误差，建议使用排枪。
    ④ 依次在 96 孔板中加入：
    【注】1. 加完试剂二即启动反应，所以试剂二加完混匀后立即检测，若 A2 值大于 1.5，可对样本进行稀
    释，稀释倍数需代入公式重新计算。
    2. 若ΔA小于0.005，可增大样本量V1（如增至20μL，提取液相应减少），或延长反应时间T（如
    增至10min或更长），则改变后的V1和反应时间T需代入公式重新计算。
    试剂名称
    规格
    保存要求
    备注
    提取液
    液体 120mL×1 瓶
    4℃保存
    试剂一
    粉剂 mg×1 瓶
    -20℃保存
    临用前甩几下或离心，使粉体落入底
    部，再加 2.6mL 蒸馏水混匀备用
    试剂二
    粉剂 mg×1 支
    4℃保存
    临用前甩几下或离心，使液体落入底
    部，再加 2.5mL 蒸馏水混匀备用
    试剂名称（
    μL）
    测定管
    样本
    10
    试剂一
    20
    提取液
    150
    试剂二
    20
    混匀，立即于 324nm 处读取 A1 值，室温（25℃）反应 3min
    后读取 A2 值。ΔA=A2-A1。本试剂盒仅供科研使用
    2
    五、结果计算：
    1、按质量计算：
    酶活定义：每克组织每分钟催化生成 1nmol 的乙醛酸苯腙定义为一个酶活单位。
    GO(nmol/g/min)=[ΔA÷(ε×d)×V2×103]÷(V1÷V×W)÷T×D=784.3×ΔA÷W×D
    2、按蛋白浓度计算：
    酶活定义：每毫克蛋白每分钟催化生成 1nmol 的乙醛酸苯腙定义为一个酶活单位。
    GO(nmol/mg/min)=[ΔA÷(ε×d)×V2×103]÷(V1×Cpr)÷T×D=784.3×ΔA÷Cpr×D
    ε---乙醛酸苯腙的摩尔吸光系数为17.0mL/μmol/cm；
    d---光径距离，0.5cm；
    V2---反应总体积，0.2mL；
    V1---样本上样量，0.01mL；
    V---提取液体积，1mL；
    W---样本鲜质量，g；
    T---反应时间，3min；
    D---稀释倍数，若未稀释则 D 值为 1。

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