磷酸葡萄糖变位酶 (PGM)试剂盒,微板法产品图

磷酸葡萄糖变位酶 (PGM)试剂盒,微板法

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  • ￥1630
  • wksubio
  • WS3650W
  • 国内
  • 2026年10月10日
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    • 详细信息
    • 文献和实验
    • 技术资料
    • 库存：

      大量

    • 英文名：

      Phosphate Glucose Mutase (PGM) Kit

    • CAS号：

      WS3650W

    • 保质期：

      3个月

    • 供应商：

      上海瓦兰生物

    • 保存条件：

      4℃

    • 规格：

      96T

    本试剂盒仅供科研使用
    磷酸葡萄糖变位酶（PGM）试剂盒说明书
    （货号：WS3650W 微板法 96 样）
    一、产品简介：
    磷酸葡萄糖变位酶（PGM）在碳水化合物代谢中起关键作用，并广泛存在于所有生物
    体中。PGM 可使葡萄糖-1-磷酸（G1P）和葡萄糖-6-磷酸（G6P）互变。当糖原分解时，PGM
    将 G1P 转化为 G6P，接着进入糖酵解途径产生 ATP，也可通过戊糖磷酸途径产生核糖和
    NADPH。相反，当细胞需要能量时，PGM 将 G6P 转化为 G1P，进而产生糖原。PGM 的
    缺乏可导致与葡萄糖存储相关的疾病。
    本试剂盒提供一种简单，灵敏，快速的测定方法：PGM 将葡萄糖-1-磷酸转化为葡萄糖
    -6-磷酸;葡萄糖-6-磷酸通过葡萄糖-6-磷酸脱氢酶氧化形成 NADPH，接着与特异显色剂反应
    生成有色物质，通过检测该有色物在 450nm 的增加速率，进而计算出 PGM 酶活性大小。
    二、试剂盒组成和配制：
    试剂名称
    规格
    保存要求
    备注
    提取液
    液体 100mL×1 瓶
    4℃保存
    试剂一
    粉剂 mg×1 支
    -20℃保存
    临用前甩几下使粉剂落入底部，再加
    1.1mL 蒸馏水充分溶解备用。
    试剂二
    粉剂 mg×1 支
    4℃保存
    临用前甩几下使粉剂落入底部，再加
    1.1mL 蒸馏水充分溶解备用。
    试剂三
    液体 1mL×1 支
    4℃保存
    试剂四
    液体 15mL×1 瓶
    4℃保存
    试剂五
    粉剂 mg×1 支
    -20℃保存
    临用前甩几下使粉剂落入底部，再加
    1.1mL 蒸馏水充分溶解备用。
    标准品
    粉剂 mg×1 支
    -20℃保存
    若重新做标曲，则用到该试剂
    三、所需的仪器和用品：
    酶标仪、96 孔板、水浴锅、台式离心机、可调式移液器、研钵、冰。
    四、磷酸葡萄糖变位酶（PGM）活性测定：
    建议正式实验前选取 2 个样本做预测定，了解本批样品情况，熟悉实验流程，避免实验
    样本和试剂浪费！
    1、样本制备：
    ① 组织样本：
    称取约 0.1g 组织，加入 1mL 提取液，进行冰浴匀浆。12000rpm 4℃离心 15min，取上
    清，置冰上待测。
    【注】：若增加样本量，可按照组织质量（
    g）：提取液体积(mL)为 1：5~10 的比例提取
    ② 细胞样本：
    先收集细胞到离心管内，离心后弃上清；取 500 万细胞加入 1mL 提取液；超声波破
    碎细胞（冰浴，功率 20％或 200W，超声 3s，间隔 10s，重复 30 次）；4ºC 约 12,000rpm
    离心 10min，取上清作为待测样品。
    【注】：若增加样本量，可按照细菌/细胞数量（104）：提取液（mL）为 500~1000：1 的比例进行提取。
    2、上机检测：
    ① 酶标仪预热 30min 以上，设置温度 37℃,调节波长至 450nm。
    ② 试剂放在 37℃水浴 5min；
    ③ 在 96 孔板中依次加入：
    试剂名称（μL）
    测定管
    样本
    10
    试剂一
    10本试剂盒仅供科研使用
    2
    试剂二
    10
    试剂三
    10
    试剂四
    150
    混匀，37℃条件下孵育 10min
    试剂五
    10
    混匀，37℃条件下，1min 时于 450nm 处读取
    吸光值 A1，11min 时读取 A2，△A=A2-A1。
    【注】：1. 若ΔA 过小，可以延长反应时间 T（如：21min 或更长）再读取 A2，或增加样本量 V1（如
    增至 20μL，则试剂四相应减小），重新调整的反应时间 T 和 V1 需代入计算公式重新计算。
    2. 若 A2 值大于 1.5，可缩减反应时间 T（如：6min 或更短）再读取 A2，或减少样本量 V1
    （如减至 5μL，则试剂四相应增加），重新调整的反应时间 T 和 V1 需代入计算公式重新计算
    五、结果计算：
    1、标准曲线方程：y = 0.0838x - 0.0173，x 是标准品摩尔质量：nmol，y 是ΔA。
    2、按样本蛋白浓度计算：
    单位定义：每毫克组织蛋白每分钟使 1nmol NADP+转换成 1nmol NADPH 为一个酶活单位。
    PGM（nmol/min /mg prot）＝[(ΔA+0.0173) ÷0.0838]÷ (V1×Cpr) ÷T=119.3×(ΔA+0.0173)÷Cpr
    3、按样本鲜重计算：
    单位定义：每克组织每分钟使 1nmol NADP+转换成 1nmol NADPH 定义为一个酶活力单位。
    PGM（nmol/min/g 鲜重）＝[(ΔA+0.0173) ÷0.0838]÷(W×V1÷V) ÷T=119.3×(ΔA+0.0173)÷W
    4、按细胞数量计算：
    单位定义:每 104个细胞每分钟使 1nmol NADP+转换成 1nmol NADPH 定义为一个酶活单位。
    PGM（nmol/min/104 cell)= [(ΔA+0.0173) ÷0.0838]÷(500×V1÷V)÷T=0.24×(△A+0.0173)
    V---加入提取液体积，1 mL；
    V1---加入样本体积，0.01 mL；
    W---样本质量，g；
    T---反应时间，10 min；
    Cpr----样本蛋白质浓度，mg/mL；建议使用本公司的 BCA 蛋白含量检测试剂盒。
    附：标准曲线制作过程：
    1 制备标准品母液（1nmol/μL）：向标准品 EP 管里面加入 0.6mL 蒸馏水（母液需在两
    天内用且-20℃保存）。
    2 把母液稀释成六个浓度梯度的标准品：0, 0.2, 0.4, 0.6, 0.8, 1. 0nmol/μL。也可根据实
    际样本来调整标准品浓度。
    3 依据加样表操作，根据结果即可制作标准曲线。

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    磷酸葡萄糖变位酶（PGM）试剂盒说明书

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    磷酸葡萄糖变位酶（PGM）试剂盒说明书微板法

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