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- wksubio
- WS5550W
- 国内
- 2025年11月15日
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- 详细信息
- 技术资料
- 库存：
大量
- 英文名：
Filter Paper Enzyme (FPA) Kit
- CAS号：
WS5550W
- 保质期：
3个月
- 供应商：
上海瓦兰生物
- 保存条件：
4℃
- 规格：
48T
本试剂盒仅供科研使用
滤纸酶（Filter paper Activity，FPA）试剂盒说明书
（货号：WS5550W 微板法 48 样）
一、产品简介：
纤维素酶是由微生物产生的多组分的酶系，能水解纤维素β-1,4 葡萄糖苷键生成葡萄糖，
研究滤纸酶活力对纤维素酶的研究具有非常重要的意义。
滤纸酶水解滤纸产生的还原糖能与 3,5-二硝基水杨酸生成红棕色氨基化合物，在 540nm
处有最大光吸收，在一定范围内反应液颜色深浅与还原糖的量成正比，可测定计算得滤纸
酶的活力。
二、试剂盒组分与配制：
试剂名称
规格
保存要求
备注
滤纸条×100 根
4℃保存
试剂一
液体 80mL×1 瓶
4℃保存
试剂二
液体 50mL×1 瓶
4℃保存
标准品
粉体 mg×1 支
4℃保存
若重新做标曲，则用到该试剂。
三、所需的仪器和用品：
酶标仪、96 孔板、天平、研钵、低温离心机、恒温水浴锅、可调式移液器。
四、滤纸酶（FPA）活性测定：
建议正式实验前选取 2 个样本做预测定，了解本批样品情况，熟悉实验流程，避免实验
样本和试剂浪费！
1、样本制备：
① 组织样本：
取约 0.1g 组织（水分充足的样本可取 0.5g），加入 1mL 蒸馏水，进行冰浴匀浆。
4℃×12000rpm 离心 10min，取上清，置冰上待测。
【注】：若增加样本量，可按照组织质量（
g）：提取液体积(mL)为 1：5~10 的比例进行提取
② 细菌或培养细胞
先收集细菌或细胞到离心管内，离心后弃上清；取约 500 万细菌或细胞加入 1mL 蒸馏
水，超声波破碎细菌或细胞（功率 300w，超声 3 秒，间隔 7 秒，总时间 3min）；
4℃×12000rpm
离心 10min，取上清，置冰上待测。
【注】：若增加样本量，可按照数量（104）：提取液体积(mL)为 500-1000：1 的比例进行提取
③ 液体样本：若是澄清液体，直接检测，若液体样本浑浊，需 4℃×12000rpm，离心 10min，
取上清液检测。
2、上机检测：
1 酶标仪预热 30min 以上，调节波长至 540nm。
2 所有试剂至常温（25℃）状态。
3 每个样本需一个自身对照即煮沸样本：样本于 95-100℃水浴锅中煮沸 10min 即可。
4 在 EP 管中依次加入：
试剂名称（
μL）
测定管
对照管
样本
100
100（煮沸样本）
滤纸条
1 根
1 根
试剂一
800
800
50℃孵育 60min
试剂二
400
400
混匀，沸水浴（95-100℃）5min，冷却至室温本试剂盒仅供科研使用
2
蒸馏水
400
400
混匀，取出 200μL 待检液至 96 孔板中，于 540nm 处读
取吸光值 A，ΔA=A 测定-A 对照（每个样本做一个样
本自身对照）。
【注】1.若 A 测定值超过 1.5，可适当对样本进行稀释再检测，或者取 200μL 至 96 孔板前先进
行稀释（如吸取 100μL 待检液+100μL 蒸馏水，相当于稀释 2 倍）,则相应的稀释倍数 D
需代入计算公式计算。
2. 若ΔA 差值接近零，可增加样本体积 V1（如增至 200μL，则蒸馏水相应减少，保持总体
积不变）或延长反应时间 T（如增至 2h）或增加取样质量 W，则改变后的 V1 和 T 和
W 需代入计算公式重新计算。
五、结果计算：
1、标准曲线方程为：y = 3.6433x + 0.0016，x 是标准品质量（mg），y 是ΔA。
2、按照蛋白浓度计算
定义：50℃下，每毫克蛋白每小时分解滤纸产生 1mg 葡萄糖所需酶量为一个酶活单位。
FPA(mg/h/mg prot)=[(ΔA-0.0016)÷3.6433]÷(V1×Cpr)÷T×D=2.74×(ΔA-0.0016)÷Cpr×D
3、按照样本质量计算
定义：50℃下，每克组织每小时分解滤纸产生 1mg 葡萄糖所需的酶量为一个酶活单位。
FPA(mg/h/g)=[(ΔA-0.0016)÷3.6433]÷(W×V1÷V)÷T×D=2.74×(ΔA-0.0016)÷W×D
4、按液体体积计算
定义：50℃下，每毫升液体每小时分解滤纸产生 1mg 葡萄糖所需酶量为一个酶活单位。
FPA(mg/h/mL)=[(ΔA-0.0016)÷3.6433]÷V1÷T×D=2.74×(ΔA-0.0016)×D
5、按细胞数量计算
定义：50℃下，每 104个细胞每小时分解滤纸产生 1mg 葡萄糖所需酶量为一酶活力单位。
FPA(mg/h/104cell)=[(ΔA-0.0016)÷3.6433]÷(V1×细胞数量÷V)÷T×D
=2.74×(ΔA-0.0016)÷细胞数量×D
V---提取液体积，1mL； V1---反应体系中加入样本体积，0.1mL；
W---样本质量，g；
T---反应时间，60min=1 小时； D---稀释倍数，未稀释即为 1;
Cpr---样本蛋白浓度，mg/mL；建议使用本公司的 BCA 蛋白含量检测试剂盒。
附：标准曲线制作过程：
1 制备标准品母液（5mg/mL）：向标准品 EP 管里面加入 1mL 蒸馏水（母液需在两天
内用且-20℃保存）。
2 把母液稀释成六个浓度梯度的标准品：0, 0.6, 1.2, 1.8, 2.4, 3. mg/mL。也可根据实际
样本来调整标准品浓度。
3 100μL 标准品+800μL 试剂一+400μL 试剂二，混匀，沸水浴（95-100℃）5min，冷
却至室温，再加 400μL 蒸馏水，混匀后取出 200μL 待检液至 96 孔板中，于 540nm
处读取吸光值 A。根据结果即可制作标准曲线。
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滤纸酶(FPA)试剂盒,微板法
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