- ￥3240
- wksubio
- WS8350F
- 国内
- 2025年07月16日
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- 详细信息
- 技术资料
- 库存：
大量
- 英文名：
Binding Starch Synthase (GBSS) Kit
- CAS号：
WS8350F
- 保质期：
3个月
- 供应商：
上海瓦兰生物
- 保存条件：
4℃
- 规格：
48T
本试剂盒仅供科研使用
结合态淀粉合成酶（Granule-bound starch synthase，GBSS）试剂盒
（货号：WS8350F 分光法 48 样）
一、产品简介：
结合态淀粉合成酶 GBSS（EC 2.4.1.21）以束缚态存在于淀粉体中，催化淀粉链的加长反应，主要负责
直链淀粉的合成。GBSS 催化 ADPG 与淀粉引物(葡聚糖)反应，将葡萄糖分子转移到淀粉引物上，同时生
成 ADP，通过反应体系中添加的酶促混合物依次催化 NADP+还原为 NADPH，且 NADPH 生成量与前一
步反应中 ADP 生成量呈正比。
传统方法是通过检测 340nm 下 NADPH 增加量，但该法检测灵敏度低，且易受到色素（如绿色叶片）
干扰，本试剂盒提供一种简单，灵敏，快速的测定方法：该酶促过程产生的 NADPH 与特异的显色探针反
应生成有色物质，通过在 450nm 下检测该有色物质的增加速率，进而计算出 GBSS 酶活性大小。
二、试剂盒的组成和配制：
试剂名称
规格
保存要求
备注
提取液
液体 120mL×1 瓶
4℃保存
试剂一
液体 90mL×1 瓶
4℃保存
试剂二
液体 6.5 mL×1 瓶
4℃保存
呈分散状态，用前务必摇匀，即可使用。
试剂三
粉体 mg×1 支
4℃保存
临用前甩几下使试剂落入底部，再加
1.1 mL 的蒸馏水溶解备用。
试剂四
粉体 mg×1 瓶
4℃保存
临用前甩几下使试剂落入底部，再加
6.5 mL 的试剂一溶解备用。
试剂五
粉体 mg×1 瓶
4℃保存
临用前甩几下使试剂落入底部，再加
41mL 的试剂一溶解备用。
试剂六
粉体 mg×1 支
4℃保存
临用前甩几下使试剂落入底部，再加
4.5mL 蒸馏水溶解备用。
试剂七
液体 4.2mL×1 瓶
4℃保存
标准品
粉剂 mg×1 支
-20℃保存 若重新做标曲，则用到该试剂。
三、所需的仪器和用品：
可见分光光度计、1mL 玻璃比色皿（光径 1cm）、水浴锅、台式离心机、可调式移液器、
研钵、冰和蒸馏水。
四、结合态淀粉合成酶（GBSS）活性检测：
建议正式实验前选取 2 个样本做预测定，了解本批样品情况，熟悉实验流程，避免实验
样本和试剂浪费！
1、样本制备：
称取约 0.1g 组织（水分多的样本可取 0.5g），加入 1mL 提取液，进行冰浴匀浆。
12000rpm，4℃离心 10min，弃上清，在沉淀中加入 1mL 提取液充分混匀，置冰上待测。
【注】：若增加样本量，可按照组织质量（
g）：提取液体积(mL)为 1：5~10 的比例提取
2、上机检测：
① 可见分光光度计预热 30min 以上，设定温度 25℃，调节波长至 450nm，蒸馏水调零。
② 所有试剂解冻至室温（25℃），在 EP 管中依次加入：
试剂名称（
μL）
测定管
对照管
样本（悬浮液）
80
80
试剂一
280
300
试剂二（用前务必摇匀）
60
60
试剂三
20
试剂四
60
60本试剂盒仅供科研使用
2
混匀，30℃反应 20min，沸水浴(95-100℃)2min，12000rpm，
4℃离心 10min，上清液待测。
③ 显色反应，在 1mL 玻璃比色皿（光径 1cm）中依次加入：
【注】：1.若ΔA 过小，可加大样本量 V1（如：增至 120μL，则试剂一相应减少，反应总体积不变）；
或延长②步中 30℃的反应时间 T（如：延至 30min 或更长）；或增加样本取样质量 W；则
调整后的 V1 和 T 和 W 需代入计算公式重新计算。
2. 若 A 测定大于 1，则可在③步中对上清液用蒸馏水进行稀释，稀释倍数 D 代入公式计算。
五、结果计算：
1、标准曲线方程：y = 0.0473x - 0.0048，x 是 NADPH 摩尔质量：nmol，y 是ΔA。
2、按样本蛋白浓度计算：
酶活定义：每毫克组织蛋白每分钟催化产生 1nmol NADPH 定义为一个酶活力单位。
GBSS(nmol/min/mg prot)=[(ΔA+0.0048)÷0.0473×(V3÷V2)]÷(Cpr×V1) ÷T ×D
=22×(ΔA+0.0048)÷Cpr×D
3、按照样本鲜重计算：
酶活定义：每克组织每分钟催化产生 1nmol NADPH 定义为一个酶活力单位。
GBSS(nmol/min/g 鲜重)=[(ΔA+0.0048)÷0.0473×(V3÷V2)]÷(W×V1÷V)÷T×D
=22×(ΔA+0.0048)÷W×D
V---加入提取液体积，1mL； V1---加入样本体积，0.08mL；V2---上清液体积，300μL；
V3---反应体系总体积，500μL； T---反应时间，20min；
W---样本质量；
Cpr---样本蛋白质浓度，mg/mL；建议使用本公司的 BCA 蛋白含量检测试剂盒。
附：标准曲线制作过程：
1 制备标准品母液（1nmol/μL）：向标准品 EP 管里面加入 0.6mL 蒸馏水（母液需在两
天内用且-20℃保存）。
2 把母液稀释成六个浓度梯度的标准品：0, 0.1, 0.2, 0.3, 0.4, 0.5. nmol/μL。也可根据实
际样本来调整标准品浓度。
3 40μL 的标准品+680μL 试剂一+40μL 试剂七，混匀，10min 后，于 450nm 处读取吸
光值，根据结果即可制作标准曲线。
上清液
300
300
试剂五
380
380
试剂六
40
40
试剂七
40
40
混匀，室温（25℃）孵育 15min，立即于 450nm 处读取吸光
值。△A=A 测定-A 对照（每个样本需做一个样本自身对照）。
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