副溶血性弧菌toxRtdhtrh三重PCR试剂盒

副溶血性弧菌toxRtdhtrh三重PCR试剂盒
产品及特点： 
副溶血性弧菌（Vibrio parahemolyticus）是一种海洋细菌，主要来源于鱼、虾、蟹、贝类和海藻等海产品。进食含有该菌的食物可致食物中毒，也称嗜盐菌食物中毒。潜伏期自 1 小时至 4 天不等，多数为 10 小时左右，起病急骤，常有腹痛、腹泻、呕吐、失水、畏寒及发热，腹痛多呈陈发性绞痛，常位于上腹部、脐周或回盲部，腹泻每日 3～20 余次不等，大便性状多样，多数为黄水样或黄糊便，约 2%～16%呈典型的血水或洗肉水样便，部分病人的粪便可为脓血样或粘液血样，对人体健康具有巨大危害，因此快速检测具有重要意义。本产品基于 PCR 原理实现同时对副溶血性孤菌 toxR/tdh/trh 三重毒力基因的检测。
1. 即开即用，用户只需要提供DNA模板。
2. 引物经过精心优化，专一性强，只扩增副溶血性弧菌toxR/tdh/trh三重，与其他病原没有交叉反应。
3. 提供阳性对照，便于区分假阴性样品。
4. PCR mix 中含上样染料，PCR后可以直接上样电泳。
5. 本试剂盒足够做40μL体系的PCR 50次，但只能用于科研。
6. 本产品由江蓝纯生物提供，不得用于临床诊断。

规格及成分：

编号	成分	规格
试剂一	PCR MagicMix 3.0	1 mL（红盖）
试剂二	超纯水	1 mL（亮黄色）
试剂三	副溶血性弧菌toxR/tdh/trh三重PCR 引物混合液	100 μL（白盖）
试剂四	副溶血性弧菌toxR/tdh/trh三重PCR 阳性对照（1×10E8 /μL）	50 μL（黄盖）
试剂五	使用手册	1 份

运输及保存： 
低温运输，-20℃保存，保存期限为一年。阳性对照需要单独放置，不要污染其他试剂。
自备试剂： 
样品 DNA。
副溶血性弧菌toxRtdhtrh三重PCR试剂盒
使用方法
一、样品 DNA 的制备：
1. 用自选方法纯化N+2个样品的DNA，本试剂盒跟市场上大多数核酸提取试剂盒兼容。可以选用本公司柱式病毒 DNAout。
2. 如果有N个样品，则需要做N+2个提取，包括一个样品制备阳性对照和一个样品制备阴性对照。样品制备阳性对照是在适量水（取决于试剂盒要求的样品起始量）中加 10μL 副溶血性弧菌toxR/tdh/trh三重PCR 阳性对照的 1000 倍稀释液而得，样品制备阴性对照是直接用水。提取结束后得到模板 DNA 放冰上待用。
二、设置 PCR 反应（40μL 体系）： 
3. 对N+2个样品，在PCR时需要增加一个PCR阳性对照和一个PCR阴性对照，故需要设置N+4个反应。在N+4个PCR管中分别加入下列成分：

成份	N+2 个样品管	PCR 阴性对照	PCR阳性对照
PCR Magic Mix 3.0	各 20μL	20μL	20μL
副溶血性弧菌toxR/tdh/trh三重PCR 引物混合液	各2μL	2μL	2μL
N+2个样品DNA模板	各18μL	--	--
PCR 阴性对照（水）	--	18μL	--
PCR 阳性对照（副溶血性弧菌toxR/tdh/trh三重PCR阳性对照1000倍稀释液）	18μL	18μL	18μL

4. 按下表设置 PCR 反应：

过程	温度	时间
预变性	95℃	5 min
PCR反应（35个循环）	95℃	30 sec
	55℃	30 sec
	72℃	40 sec
延伸	72℃	7 min

三、电泳检测：
5. 取 10-20 μL PCR 产物。电泳检测 PCR 产物。本产品提供的 PCR Mix 在 扩增结束后可以直接上样，不需要另外再加 loading buffer。PCR 产物阳 性对照必须有 551bp 大小的条带出现，阴性对照必须无任何扩增，否则实 验无效。对没有扩增产物的样品，可以稀释 10 倍后重复 PCR 扩增以排除 PCR 抑制剂的感染。