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- 详细信息
- 文献和实验
- 技术资料
- 保存条件:
避光低温保存
- 保质期:
6个月
- 英文名:
普氏立克次氏体PCR试剂盒
- 库存:
大量
- 供应商:
江西江蓝纯生物试剂有限公司
- 规格:
50次
产品及特点:
1. 即开即用,用户只需要提供DNA模板。
2. 引物经过精心优化,专一性强,只扩增普氏立克次氏体,与其他病原没有交叉反应。
3. 提供阳性对照,便于区分假阴性样品。
4. PCR mix 中含上样染料,PCR后可以直接上样电泳。
5. 本试剂盒足够做40μL体系的PCR 50次,但只能用于科研。
6. 本产品由江蓝纯生物提供,不得用于临床诊断。
规格及成分:
| 编号 | 成分 | 规格 |
| 试剂一 | PCR MagicMix 3.0 | 1 mL(红盖) |
| 试剂二 | 超纯水 | 1 mL(亮黄色) |
| 试剂三 | 普氏立克次氏体 PCR 引物混合液 | 100 μL(白盖) |
| 试剂四 | 普氏立克次氏体 PCR 阳性对照(1×10E8/μL) | 50 μL(黄盖) |
| 试剂五 | 使用手册 | 1 份 |
低温运输,-20℃保存,保存期限为一年。阳性对照需要单独放置,不要污染其他试剂。
自备试剂:
样品 DNA。
普氏立克次氏体PCR试剂盒
使用方法
一、样品 DNA 的制备:
1. 用自选方法纯化N+2个样品的DNA,本试剂盒跟市场上大多数核酸提取试剂盒兼容。可以选用本公司柱式病毒 DNAout。
2. 如果有N个样品,则需要做N+2个提取,包括一个样品制备阳性对照和一个样品制备阴性对照。样品制备阳性对照是在适量水(取决于试剂盒要求的样品起始量)中加 10μL 普氏立克次氏体 PCR 阳性对照的 1000 倍稀释液而得,样品制备阴性对照是直接用水。提取结束后得到模板 DNA 放冰上待用。
二、设置 PCR 反应(40μL 体系):
3. 对N+2个样品,在PCR时需要增加一个PCR阳性对照和一个PCR阴性对照,故需要设置N+4个反应。在N+4个PCR管中分别加入下列成分:
| 成份 | N+2 个样品管 | PCR 阴性对照 | PCR阳性对照 |
| PCR Magic Mix 3.0 | 各 20μL | 20μL | 20μL |
| 普氏立克次氏体PCR 引物混合液 | 各2μL | 2μL | 2μL |
| N+2个样品DNA模板 | 各18μL | -- | -- |
| PCR 阴性对照(水) | -- | 18μL | -- |
| PCR 阳性对照(普氏立克次氏体PCR阳性对照1000倍稀释液) | -- | -- | 18μL |
| 过程 | 温度 | 时间 |
| 预变性 | 95℃ | 5 min |
| PCR反应(35个循环) | 95℃ | 30 sec |
| 55℃ | 30 sec | |
| 72℃ | 40 sec | |
| 延伸 | 72℃ | 7 min |
5. 取 10-20 μL PCR 产物。电泳检测 PCR 产物。本产品提供的 PCR Mix 在 扩增结束后可以直接上样,不需要另外再加 loading buffer。PCR 产物阳 性对照必须有 551bp 大小的条带出现,阴性对照必须无任何扩增,否则实 验无效。对没有扩增产物的样品,可以稀释 10 倍后重复 PCR 扩增以排除 PCR 抑制剂的感染。
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文献和实验专性细胞内寄生、行二分裂繁殖的原核微生物类群。英国医生立克次氏(H.T.Ricketts)研究斑疹伤寒时发现,并于1919年命名。大小介于细菌与病毒之间,除Q热立克次氏体外,均不能通过细菌滤器。细胞球状、杆状或多形态。球状体直径0.2~0.5微米,杆状体大小0.3~0.6×0.8~20微米,有些种在细胞分裂前可长达4微米。形态特征对种的鉴定有重要意义。革兰氏染色阴性。在光学显微镜下可见,存在于宿主的胞质或细胞核中。细胞结构与细菌相似,细胞壁中含有胞壁酸,二氨基庚二酸等与细菌
,如引起斑疹伤寒、斑点热、恙虫病等;它与一些昆虫关系密切,如森林蜱、体虱,都可以是立克次体的宿主或储存宿主,通过它们作为传播媒介而感染人。3、名称由来立克次氏体是1909年美国病理学副教授立克次(Howard Taylor Ricketts, 1871–1910), 在研究落基山斑疹热时首先发现的。第二年,他不幸因感染斑疹伤寒而为科学献身。1916年罗恰•利马首先从斑疹伤寒病人的体虱中找到,并建议取名为普氏立克次氏体,以纪念从事斑疹伤寒研究而牺牲的立克次和捷克科学家普若瓦帅克。1934年,我国
。 莫氏立克次体的传播方式普氏立克次体有所不同。莫氏立克次体长期寄生于隐性感染鼠体,鼠蚤吸鼠血后,立克次体进入其消化道并在肠上皮细胞内繁殖。细胞破裂后将立克次体释出,混入蚤粪中,在鼠和小家鼠群间传播。鼠蚤只在鼠死亡后才离开鼠转向叮吮人血,而使人受感染。如此时人体寄生有人虱,可通过人虱继发地在人群中传播。此外,带有立克次体的干燥蚤粪还可经口、鼻及眼结膜进入人体而致病。 莫氏立克次体感染后与普氏立克次体有交叉免疫。 (三)诊断与防治 微生物学检查原则与普氏立克次体基本










