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- 详细信息
- 文献和实验
- 技术资料
- 保存条件:
避光低温保存
- 保质期:
6个月
- 英文名:
萨氏假单胞菌菜豆致病变种PCR试剂盒
- 库存:
大量
- 供应商:
江西江蓝纯生物试剂有限公司
- 规格:
50次
产品及特点:
1. 即开即用,用户只需要提供DNA模板。
2. 引物经过精心优化,专一性强,只扩增萨氏假单胞菌菜豆致病变种,与其他病原没有交叉反应。
3. 提供阳性对照,便于区分假阴性样品。
4. PCR mix 中含上样染料,PCR后可以直接上样电泳。
5.本试剂盒足够做40μL体系的PCR 50次,但只能用于科研。
6.本产品由江蓝纯生物提供,不得用于临床诊断。
规格及成分:
| 编号 | 成分 | 规格 |
| 试剂一 | PCR MagicMix 3.0 | 1 mL(红盖) |
| 试剂二 | 超纯水 | 1 mL(亮黄色) |
| 试剂三 | 萨氏假单胞菌菜豆致病变种PCR 引物混合液 | 100 μL(白盖) |
| 试剂四 | 萨氏假单胞菌菜豆致病变种PCR 阳性对照(1×10E8 /μL) | 50 μL(黄盖) |
| 试剂五 | 使用手册 | 1 份 |
低温运输,-20℃保存,保存期限为一年。阳性对照需要单独放置,不要污染其他试剂。
自备试剂:
样品 DNA。
萨氏假单胞菌菜豆致病变种PCR试剂盒
使用方法
一、样品 DNA 的制备:
1. 用自选方法纯化N+2个样品的DNA,本试剂盒跟市场上大多数核酸提取试剂盒兼容。可以选用本公司柱式病毒 DNAout。
2. 如果有N个样品,则需要做N+2个提取,包括一个样品制备阳性对照和一个样品制备阴性对照。样品制备阳性对照是在适量水(取决于试剂盒要求的样品起始量)中加 10μL 萨氏假单胞菌菜豆致病变种PCR 阳性对照的 1000 倍稀释液而得,样品制备阴性对照是直接用水。提取结束后得到模板 DNA 放冰上待用。
二、设置 PCR 反应(40μL 体系):
3. 对N+2个样品,在PCR时需要增加一个PCR阳性对照和一个PCR阴性对照,故需要设置N+4个反应。在N+4个PCR管中分别加入下列成分:
| 成份 | N+2 个样品管 | PCR 阴性对照 | PCR阳性对照 |
| PCR Magic Mix 3.0 | 各 20μL | 20μL | 20μL |
| 萨氏假单胞菌菜豆致病变种PCR 引物混合液 | 各2μL | 2μL | 2μL |
| N+2个样品DNA模板 | 各18μL | -- | -- |
| PCR 阴性对照(水) | -- | 18μL | -- |
| PCR 阳性对照(萨氏假单胞菌菜豆致病变种PCR阳性对照1000倍稀释液) | -- | -- | 18μL |
| 过程 | 温度 | 时间 |
| 预变性 | 95℃ | 5 min |
| PCR反应(35个循环) | 95℃ | 30 sec |
| 55℃ | 30 sec | |
| 72℃ | 40 sec | |
| 延伸 | 72℃ | 7 min |
5. 取 10-20 μL PCR 产物。电泳检测 PCR 产物。本产品提供的 PCR Mix 在 扩增结束后可以直接上样,不需要另外再加 loading buffer。PCR 产物阳 性对照必须有 551bp 大小的条带出现,阴性对照必须无任何扩增,否则实 验无效。对没有扩增产物的样品,可以稀释 10 倍后重复 PCR 扩增以排除 PCR 抑制剂的感染。
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文献和实验cocovenenans)是我国学者于 1977 年发现的一种高致死性的食源性致病菌,于 1999 年将其划分为唐菖蒲伯克霍尔德氏菌(Burkholderia gladioli)的一个病原型。 椰毒假单胞菌是兼性厌氧,广泛分布于自然界,易在食品表面生长。最适合的生长温度为 37℃,最适合的产毒温度为 26℃,pH5-7 范围内生长较好。长时间发酵或浸泡,加上炎热和潮湿的环境,很容易导致椰毒假单胞菌的滋生,产生毒性强大的米酵菌酸。 椰毒假单胞菌是革兰阴性杆菌,于 PCFA 培养基 36℃±1℃培养 24
开。由此可见,PCR-SSCP分析技术是一种DNA单链凝胶电泳技术,它根据形成不同构象的等长DNA单链在中性聚丙烯酰胺凝胶中的电泳迁移率变化来检测基因变异。该技术已被广泛用于癌基因和抗癌基因变异的检测、遗传病的致病基因分析以及基因诊断、基因制图等领域。 为了高灵敏特异性地显示SSCP分析结果,现已发展多种PCR-SSCP技术,各有其优势及适用领域。例如,可以在PCR扩增中用同位素或荧光素等标记引物或核苷,也可以在电泳后用银染或溴化乙锭染色以显示结果。这里将重点介绍最常用的放射性同位素PCR-SSCP法
,并与典型菌落特征相符,即表明已获得纯培养,最好要经过连续三次单菌落的分离。确保纯化。 3.2.3细菌的培养 病原细菌的培养条件因种类不同而略异。棒杆菌属细菌的生长适温较低(20-23℃);假单胞菌中的青枯菌类则要求在较高的温度(35℃)下才能良好地发育;软腐型欧氏杆菌在厌氧条件下生长比好气条件下生长更快,致病力更强。 3.3植物病毒分离和纯化 植物病毒的分离和纯化比较特殊,由于病毒是专性寄生物,因此不能离开活的寄主。操作时虽然不需无菌操作,但仍必须实行严格的隔离以防止污染和混杂。 ′











