猪胸膜肺炎放线杆菌PCR试剂盒

猪胸膜肺炎放线杆菌PCR试剂盒
产品及特点： 
胸膜肺炎放线杆菌(Actinobacillus pleuropneumoniae)是一种呼吸道寄生菌，主要存在于患病动物的肺部和扁桃体，病猪和带菌猪是本病的主要传染源。本病的感染途径是呼吸道，即通过咳嗽、喷嚏喷出的分泌物和渗出物而传播，而接触传播可能是其主要的传播途径。国内外的研究及临床实践表明，猪患呼吸系统疾病时，容易发生继发感染或混合感染。如本病与猪伪狂犬、兰耳病、多杀性巴氏杆菌、肺炎霉形体、嗜血杆菌等病原的混合感染，应引起高度重视，因此快速检测胸膜肺炎放线杆菌具有重要意义。
本产品是根据 PCR 原理开发的猪胸膜肺炎放线杆菌检测试剂盒，它具有下列特点： 
1. 即开即用，用户只需要提供DNA模板。
2. 引物经过精心优化，专一性强，只扩增猪胸膜肺炎放线杆菌，与其他病原没有交叉反应。
3. 提供阳性对照，便于区分假阴性样品。
4. PCR mix 中含上样染料，PCR后可以直接上样电泳。
5. 本试剂盒足够做40μL体系的PCR 50次，但只能用于科研。
6. 本产品由江蓝纯生物提供，不得用于临床诊断。

规格及成分：

编号	成分	规格
试剂一	PCR MagicMix 3.0	1mL（红盖）
试剂二	超纯水	1mL（亮黄色）
试剂三	猪胸膜肺炎放线杆菌PCR引物混合液	100μL（白盖）
试剂四	猪胸膜肺炎放线杆菌PCR阳性对照（1×10E8 /μL）	50μL（黄盖）
试剂五	使用手册	1 份

运输及保存： 
低温运输，-20℃保存，保存期限为一年。阳性对照需要单独放置，不要污染其他试剂。
自备试剂： 
样品 DNA。
猪胸膜肺炎放线杆菌PCR试剂盒
使用方法
一、样品 DNA 的制备：
1. 用自选方法纯化N+2个样品的DNA，本试剂盒跟市场上大多数核酸提取试剂盒兼容。可以选用本公司柱式病毒 DNAout。
2. 如果有N个样品，则需要做N+2个提取，包括一个样品制备阳性对照和一个样品制备阴性对照。样品制备阳性对照是在适量水（取决于试剂盒要求的样品起始量）中加10μL猪胸膜肺炎放线杆菌PCR阳性对照的 1000 倍稀释液而得，样品制备阴性对照是直接用水。提取结束后得到模板 DNA 放冰上待用。
二、设置 PCR 反应（40μL 体系）： 
3. 对N+2个样品，在PCR时需要增加一个PCR阳性对照和一个PCR阴性对照，故需要设置N+4个反应。在N+4个PCR管中分别加入下列成分：

成份	N+2个样品管	PCR阴性对照	PCR阳性对照
PCR Magic Mix 3.0	各20μL	20μL	20μL
猪胸膜肺炎放线杆菌PCR引物混合液	各2μL	2μL	2μL
N+2个样品DNA模板	各18μL	--	--
PCR阴性对照（水）	--	18μL	--
PCR阳性对照（猪胸膜肺炎放线杆菌PCR阳性对照1000倍稀释液）	--	--	18μL

4. 按下表设置 PCR 反应：

过程	温度	时间
预变性	95℃	5 min
PCR反应（35个循环）	95℃	30 sec
	55℃	30 sec
	72℃	40 sec
延伸	72℃	7 min

三、电泳检测：
5. 取 10-20 μL PCR 产物。电泳检测 PCR 产物。本产品提供的 PCR Mix 在 扩增结束后可以直接上样，不需要另外再加 loading buffer。PCR 产物阳 性对照必须有 551bp 大小的条带出现，阴性对照必须无任何扩增，否则实 验无效。对没有扩增产物的样品，可以稀释 10 倍后重复 PCR 扩增以排除 PCR 抑制剂的感染。