柑橘溃疡病菌PCR试剂盒

柑橘溃疡病菌PCR试剂盒
产品及特点：
柑橘溃疡病（citrus bacterial canker disease, CBCD）是柑橘上最严重的病害之一，常引起柑橘落叶、枯枝、落果，导致树势减弱。此外，该病常在果实表面留下病斑，降低果实美观度，不利于市场销售。因此，柑橘溃疡病被世界 30 多个国家包括我国或地区列为植物检疫性病害。它是由黄单胞杆菌柑橘致病变种（Xanthomonas axonopodis pv. citri）引起的，能够侵染多种芸香科植物，包括柑橘属中的绝大多数商品化栽培品种。远距离传播通过苗木、接穗、鲜果调运，田间传播通过风雨和潜叶蛾、恶性叶甲等昆虫。快速准确检测柑橘溃疡病菌，是减少柑橘产业经济损失的重要途径。近年来，分子生物学的快速发展为植物病原菌的检测提供了新的方法和手段。本产品是根据 PCR 原理开发检测柑橘溃疡病菌的试剂盒， 
1. 即开即用，用户只需要提供DNA模板。
2. 引物经过精心优化，专一性强，只扩增柑橘溃疡病菌，与其他病原没有交叉反应。
3. 提供阳性对照，便于区分假阴性样品。
4. PCR mix 中含上样染料，PCR后可以直接上样电泳。
5. 本试剂盒足够做40μL体系的PCR 50次，但只能用于科研。

规格及成分：

编号	成分	规格
试剂一	PCR MagicMix 3.0	1 mL（红盖）
试剂二	超纯水	1 mL（亮黄色）
试剂三	柑橘溃疡病菌PCR 引物混合液	100 μL（白盖）
试剂四	柑橘溃疡病菌PCR 阳性对照（1×10E8/μL）	50 μL（黄盖）
试剂五	使用手册	1 份

运输及保存：
低温运输，-20℃保存，保存期限为一年。阳性对照需要单独放置，不要污染其他试剂。
自备试剂：
样品 DNA。
柑橘溃疡病菌PCR试剂盒
使用方法：
一、样品 DNA 的制备： 
1. 用自选方法纯化N+2个样品的DNA，本试剂盒跟市场上大多数核酸提取试剂盒兼容。可以选用本公司柱式病毒 DNAout。
2. 如果有N个样品，则需要做N+2个提取，包括一个样品制备阳性对照和一个样品制备阴性对照。样品制备阳性对照是在适量水（取决于试剂盒要求的样品起始量）中加 10μL 柑橘溃疡病菌PCR 阳性对照的 1000 倍稀释液而得，样品制备阴性对照是直接用水。提取结束后得到模板 DNA 放冰上待用。
二、设置PCR反应(40 μL 体系)： 
3. 对N+2个样品，在PCR时需要增加一个PCR阳性对照和一个PCR阴性对照，故需要设置N+4个反应。在N+4个PCR管中分别加入下列成分：

成份	N+2 个样品管	PCR 阴性对照	PCR阳性对照
PCR Magic Mix 3.0	各 20μL	20μL	20μL
柑橘溃疡病菌PCR 引物混合液	各2μL	2μL	2μL
N+2个样品DNA模板	各18μL	--	--
PCR 阴性对照（水）	--	18μL	--
PCR 阳性对照（柑橘溃疡病菌PCR阳性对照1000倍稀释液）	--	--	18μL

4.按下表设置 PCR 反应：  

过程	温度	时间
预变性	95℃	5 min
PCR 反应35个循环	95℃	30 sec
	55℃	30 sec
	72℃	40 sec
延伸	72℃	7 min

三、电泳检测： 
5. 取 10-20 μL PCR 产物。电泳检测 PCR 产物。本产品提供的 PCR Mix 在 扩增结束后可以直接上样，不需要另外再加 loading buffer。PCR 产物阳 性对照必须有 551bp 大小的条带出现，阴性对照必须无任何扩增，否则实 验无效。对没有扩增产物的样品，可以稀释 10 倍后重复 PCR 扩增以排除 PCR 抑制剂的感染。