- ￥2990
- 晶抗生物
- 国内
- JK-R9701
- 2025年07月15日
企业认证
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- 详细信息
- 文献和实验
- 技术资料
- 保存条件：
避光低温保存
- 保质期：
6个月
- 英文名：
牛附红细胞体(牛嗜血支原体)PCR试剂盒
- 库存：
大量
- 供应商：
上海晶抗生物工程有限公司
- 规格：
50次
产品及特点：
1. 即开即用，用户只需要提供DNA模板。
2. 引物经过精心优化，专一性强，只扩增牛附红细胞体（牛嗜血支原体），与其他病原没有交叉反应。
3. 提供阳性对照，便于区分假阴性样品。
4. PCR mix 中含上样染料，PCR后可以直接上样电泳。
5. 本试剂盒足够做40μL体系的PCR 50次，但只能用于科研。
规格及成分：
| 编号 | 成分 | 规格 |
| 试剂一 | PCR MagicMix 3.0 | 1 mL（红盖） |
| 试剂二 | 超纯水 | 1 mL（亮黄色） |
| 试剂三 | 牛附红细胞体（牛嗜血支原体） PCR 引物混合液 | 100 μL（白盖） |
| 试剂四 | 牛附红细胞体（牛嗜血支原体） PCR 阳性对照（1×10E8 /μL） | 50 μL（黄盖） |
| 试剂五 | 使用手册 | 1 份 |
低温运输，-20℃保存，保存期限为一年。阳性对照需要单独放置，不要污染其他试剂。
自备试剂：
样品DNA。
牛附红细胞体(牛嗜血支原体)PCR试剂盒
使用方法：
一、样品 DNA 的制备：
1. 用自选方法纯化N+2个样品的DNA，本试剂盒跟市场上大多数核酸提取试剂盒兼容。可以选用本公司柱式病毒 DNAout。
2. 如果有N个样品，则需要做N+2个提取，包括一个样品制备阳性对照和一个样品制备阴性对照。样品制备阳性对照是在适量水（取决于试剂盒要求的样品起始量）中加 10μL 牛附红细胞体（牛嗜血支原体）PCR 阳性对照的 1000 倍稀释液而得，样品制备阴性对照是直接用水。提取结束后得到模板 DNA 放冰上待用。
二、设置 PCR 反应（40μL 体系）：
3. 对N+2个样品，在PCR时需要增加一个PCR阳性对照和一个PCR阴性对照，故需要设置N+4个反应。在N+4个PCR管中分别加入下列成分：
| 成份 | N+2 个样品管 | PCR 阴性对照 | PCR阳性对照 |
| PCR Magic Mix 3.0 | 各 20μL | 20μL | 20μL |
| 牛附红细胞体（牛嗜血支原体）PCR 引物混合液 | 各2μL | 2μL | 2μL |
| N+2个样品DNA模板 | 各18μL | -- | -- |
| PCR 阴性对照（水） | -- | 18μL | -- |
| PCR 阳性对照（牛附红细胞体（牛嗜血支原体）PCR阳性对照1000倍稀释液） | -- | -- | 18μL |
| 过程 | 温度 | 时间 |
| 预变性 | 95℃ | 5 min |
| PCR 反应35个循环 | 95℃ | 30 sec |
| 55℃ | 30 sec | |
| 72℃ | 40 sec | |
| 延伸 | 72℃ | 7 min |
5. 取 10-20 μL PCR 产物。电泳检测 PCR 产物。本产品提供的 PCR Mix 在 扩增结束后可以直接上样，不需要另外再加 loading buffer。PCR 产物阳 性对照必须有 551bp 大小的条带出现，阴性对照必须无任何扩增，否则实 验无效。对没有扩增产物的样品，可以稀释 10 倍后重复 PCR 扩增以排除 PCR 抑制剂的感染。
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文献和实验USP标准。 支原体：在支原体专业培养基上培养了3～4周，培养温度36℃±2℃ 分别在需氧和厌氧条件下进行，有的还需要在支原体琼脂培养皿上传4次，Hoechst荧光素DNA染色检查那些培养法 无法检出的支原体如猪鼻支原体等。 病毒检查： 牛兰舌病毒 Bovin blue tongue 牛腺病毒 Bovine Adenovirus 牛细小病毒 Bovine Parvovirus 牛病毒性腹泄病毒 Bovine Viral Diarhea Virus 狂犬病病毒
染色液覆盖菌落，1min后，用生理盐水洗去染色液，低倍镜下可见支原体菌落呈蓝色，而其他菌菌落不着色。（2）生化反应根据不同采样部位及对底物的分解或者作为能源，可以鉴别不同支原体。解脲支原 分解尿素不分解精氨酸，生成NH3使培养基的ph升高，酚红指示剂变红。人型支原体分解L－精氨酸不分解尿素，生成NH3使PH值升高，酚红指示剂变红。肺炎和人型支原体分解葡萄糖，使pH降低，酚红指示剂由红变黄。（3）在含0.002%美蓝的培养基中肺炎支原体能生长且将美蓝还原而退色，其他口腔、唾液或发酵支原体均被抑制
液： 美蓝 2.5g 天青-Ⅱ 1.5g 麦芽糖 10g 碳酸钠 0.5g 蒸馏水 100ml 染色时，直接吸染色液覆盖菌落，1min后，用生理盐水洗去染色液，低倍镜下可见支原体菌落呈蓝色，而其他菌菌落不着色。 (2)生化反应 根据不同采样部位及对底物的分解或者作为能源，可以鉴别不同支原体。 解脲支原 分解尿素不分解精氨酸，生成NH3使培养基的ph升高，酚红指示剂变红。 人型支原体分解L-精氨酸不分解尿素，生成NH3使PH
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