禽致病性大肠杆菌O1血清型PCR试剂盒

禽致病性大肠杆菌O1血清型PCR试剂盒
产品及特点： 
禽致病性大肠杆菌 O1 血清型（Avian Pathogenicity Escherichia coli， APEC）会引发大肠杆菌败血症，尤其在冬季发病率高，死淘率通常在 5%-20%， 严重的可达 50%，雏鸡在夏季也较多发，病鸡精神不振，采食减少，衰弱和死 亡，病鸡腹部膨满，排出黄绿色的稀便，特征性的病变是纤维素性心包炎，气 囊混浊肥厚，有干酪样渗出物，肝包膜呈白色混浊，有纤维素性附着物，有时 可见白色坏死斑，脾充血肿胀，给养殖业带来较大的经济损失，因此禽致病性 大肠杆菌 O1 血清型检测具有重要的意义。本试剂盒根据荧光定量 PCR 原理开 发，它具有下列特点： 
1. 即开即用，用户只需要提供DNA模板。
2. 引物经过精心优化，专一性强，只扩增禽致病性大肠杆菌O1血清型，与其他病原没有交叉反应。
3. 提供阳性对照，便于区分假阴性样品。
4. PCR mix 中含上样染料，PCR后可以直接上样电泳。
5. 本试剂盒足够做40μL体系的PCR 50次，但只能用于科研。

规格及成分：

编号	成分	规格
试剂一	PCR MagicMix 3.0	1 mL（红盖）
试剂二	超纯水	1 mL（亮黄色）
试剂三	禽致病性大肠杆菌O1血清型 PCR 引物混合液	100 μL（白盖）
试剂四	禽致病性大肠杆菌O1血清型 PCR 阳性对照（1×10E8 /μL）	50 μL（黄盖）
试剂五	使用手册	1 份

运输及保存：
低温运输，-20℃保存，保存期限为一年。阳性对照需要单独放置，不要污染其他试剂。
自备试剂：
样品DNA。
禽致病性大肠杆菌O1血清型PCR试剂盒
使用方法：
一、样品 DNA 的制备：
1. 用自选方法纯化N+2个样品的DNA，本试剂盒跟市场上大多数核酸提取试剂盒兼容。可以选用本公司柱式病毒 DNAout。
2. 如果有N个样品，则需要做N+2个提取，包括一个样品制备阳性对照和一个样品制备阴性对照。样品制备阳性对照是在适量水（取决于试剂盒要求的样品起始量）中加10μL禽致病性大肠杆菌O1血清型PCR阳性对照的1000倍稀释液而得，样品制备阴性对照是直接用水。提取结束后得到模板 DNA放冰上待用。
二、设置 PCR 反应（40μL 体系）：
3. 对N+2个样品，在PCR时需要增加一个PCR阳性对照和一个PCR阴性对照，故需要设置N+4个反应。在N+4个PCR管中分别加入下列成分：

成份	N+2 个样品管	PCR 阴性对照	PCR阳性对照
PCR Magic Mix 3.0	各 20μL	20μL	20μL
禽致病性大肠杆菌O1血清型PCR 引物混合液	各2μL	2μL	2μL
N+2个样品DNA模板	各18μL	--	--
PCR 阴性对照（水）	--	18μL	--
PCR 阳性对照（禽致病性大肠杆菌O1血清型PCR阳性对照1000倍稀释液）	--	--	18μL

4.按下表设置 PCR 反应：

过程	温度	时间
预变性	95℃	5 min
PCR 反应35个循环	95℃	30 sec
	55℃	30 sec
	72℃	40 sec
延伸	72℃	7 min

三、电泳检测：
5. 取 10-20 μL PCR 产物。电泳检测 PCR 产物。本产品提供的 PCR Mix 在 扩增结束后可以直接上样，不需要另外再加 loading buffer。PCR 产物阳 性对照必须有 551bp 大小的条带出现，阴性对照必须无任何扩增，否则实 验无效。对没有扩增产物的样品，可以稀释 10 倍后重复 PCR 扩增以排除 PCR 抑制剂的感染。