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- 详细信息
- 文献和实验
- 技术资料
- 库存:
46
- 保质期:
有效期 12 个月
- 供应商:
上海帛科
- 保存条件:
避光-20℃储存
- 规格:
50T
| 产品名称 | 规格 | 货号 |
| 水痘RT-带状疱疹病毒野生株探针法荧光定量PCR试剂盒 | 50T | BKP7339 |
本试剂盒即开即用,用户只需要提供样品 DNA 模板,引物经过优化,灵敏性高,分析灵敏度可以达到 100 拷贝/反应,提供阳性对照,便于区分假阴性样品,特异性高,引物是根据指标高度保守区设计,不会跟其他生物的 DNA发生交叉反应,本产品足够 50 次 20μL 体系的染料法荧光定量 PCR 反应,既可用于定性,也可用于定量。用于定量时线性范围至少5个数量级。
水痘RT-带状疱疹病毒野生株探针法荧光定量PCR试剂盒【试剂组成】
| 名 称 | 规 格 |
| 2×SYBR qPCR MasterMix | 0.5mL×1管 |
| 荧光 PCR 专用模板稀释液 | 1mL×1 管 |
| 超纯水 | 1mL×1 管 |
| 染料法qPCR 引物混合液 | 100μL×1 管 |
| qPCR 阳性对照(1×10E7 拷贝/μL) | 50μL ×1 管 |
水痘RT-带状疱疹病毒野生株探针法荧光定量PCR试剂盒【使用方法】
试剂准备(试剂准备区)
稀释标准曲线样品(以 10E1-10E6 拷贝/μL 这 6 个 10 倍稀释度为例)。
由于标准品浓度非常高,因此下列稀释操作一定要在独立的区域进行,千万不能污染样品或本试剂盒的其他成分)。为增加产品稳定性和避免扩散传染性病原,本产品不提供活体样品做阳性对照,只提供无传染性的 DNA 片段作为阳性对照。
1. 标记 6 个离心管,分别为 6,5,4,3,2,1。
2. 用带芯枪头分别加入 45 μL 荧光 PCR 专用模板稀释液,最好用带芯枪头,下同。
3. 在 6 号管中加入 5 μL 1×10E7 拷贝/μL 的阳性对照(试剂盒提供),充分震荡 1 分钟,得 1×10E6 拷贝/μL 的标准曲线样品。放冰上待用。
4. 换枪头,在 5 号管中加入 5 μL 1×10E6 拷贝/μL 的阳性对照(上步稀释所得),充分震荡 1 分钟,得 1×10E5 拷贝/μL 的标准曲线样品。放冰上待用。
5. 换枪头,在 4 号管中加入 5 μL 1×10E5 拷贝/μL 的阳性对照(上步稀释所得),充分震荡 1 分钟,得 1×10E4 拷贝/μL 的标准曲线样品。放冰上待用。
6. 重复上面的操作直到得到 6 个稀释度的标准曲线样品。放冰上待用。
样本处理(样本处理区)
2.1如果有 N 个样品,最好设置 N+2 个提取,多出的一个是PC(样品制备阳性对照),一个是 NC(样品制备阴性对照)。可以用 10μL 第 6 步所得的第 4 号稀释液(1×10E4 拷贝/μL)再加上一定量的水使总体积跟核酸纯化试剂盒所要求的起始样本体积一样,以此作为 PC。另外用水作为 NC。
2.2核酸提取:核酸提取可以采用公司的核酸提取或纯化试剂,操作方法按照说明书进行。
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文献和实验-A尾巴的RNA分子加上一串A尾巴,然后用带有一段通用序列(universal tag)的Oligo-dT及RT酶来合成cDNA。这样设计的一个好处就是一次RT反应合成了所有miRNA分子以及其他小RNA、mRNA对应的cDNA,接下来想用来检测什么都可以,细细算来省了不少特异引物和多次RT反应的钱呢!整个RT反应操作也是非常简单,加入预先混好的酶,37℃孵育60min,95℃孵育5min即完成cDNA合成。 最后一步就是取出一点cDNA为扩增模板,加入正反引物和real-time PCR 试剂盒
实验室检测和快速诊断的标准如《GB/T 19438.1-2004禽流感病毒通用荧光RT-PCR检测方法》、《GB/T 19438.2-2004 H5亚型禽流感病毒荧光RT-PCR检测方法》、《GB/T 19438.3-2004 H7亚型禽流感病毒荧光RT-PCR检测方法》等。以上实时荧光定量PCR技术在禽流感检测方面的国家标准是该技术在当前的人感染猪流感诊断中应用的基础和前提。实时荧光定量PCR技术及在我国卫生应急中的应用要求实时荧光定量PCR技术(Real-time quantitative
如何获得高质量、高可信度的荧光定量PCR结果--高质量cDNA标准
过程,无RNA损失。这就需要裂解液即可迅速裂解细胞,高效的保护RNA,又不会影响高效反转录反应,且对于后续荧光定量PCR无抑制作用。FastLine细胞到cDNA快速制备试剂盒(KR105,TIANGEN),一站式完成从细胞到cDNA的快速制备,同时去除基因组DNA残留,整个操作流程仅需50 min,获得的cDNA不但可以直接进行荧光定量 PCR还可以和正常提取RNA后进行第一链反转录后得到的cDNA一样,冷冻保存供以后使用,是从少量细胞快速制备cDNA的最佳选择,并可实现高通量检测。 图
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