- ￥4490
- 帛科
- BKP6528
- 国产
- 2025年07月12日
企业认证
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- 详细信息
- 文献和实验
- 技术资料
- 库存：
59
- 保质期：
有效期 12 个月
- 供应商：
上海帛科
- 保存条件：
避光-20℃储存
- 规格：
50T
1．样本种类：鼻/咽拭子、痰液、支气管肺泡灌洗液；培养物等样品。
2．保存条件：采集的标本应及时送检，24 小时内检测的应 4℃保存，超过 24 小时的最好-70℃保存，并避免反复冻融。
【储存条件及有效期】
1．避光-20℃储存，有效期 12 个月。
2．低温运输不能超过 4 天；开封后避光-20℃储存，对有效期没有影响。避免反复冻融，冻融 6 次不影响检测效果。
3．生产日期、有效期至：见外包装盒。
【适用仪器】
适用于 ABI 7500、Bio-Rad CFX96、Roche480 等全自动荧光PCR 检测仪。
羊痘病毒探针法荧光定量PCR试剂盒【检测方法】
1 ． 试剂准备（试剂准备区）
将试剂盒各组分置 4℃避光融化，充分混匀后瞬间离心。计算试剂使用份数 N（N=样本数+1 管阳性对照+1 管阴性对照），根据下表配置反应体系mix，加入一适当体积离心管中，充分混匀后瞬间离心，按 20μL 分装至 PCR 反应管/板，并转移至样本处理区。
| 组分 | 体积（μL ） |
| qPCR 预混液（含酶） | 16 |
| 引物探针 | 4 |
| 总体积（反应体系 mix ） | 20 |
【结果判定】
通过溶解曲线分析的结果排除无效数据。有 Ct 值，但 Tm 值跟阳性对照 Tm不一样的样品（包括对照和待测样品），归为假阳性，数据无效，不予以分析。Tm 跟阳性对照 Tm 一致的，为有效 Ct。
如果两种阴性对照的溶解曲线所得 Tm 值跟阳性对照的 Tm 值一样，说明环境或试剂可能有过去的 PCR 扩增产物污染，则此次实验无效，需要解决污染问题再进行实验。
如果两种阴性对照（样品制备阴性对照和 PCR 阴性对照）是假阳性，可以继续分析其它样品有效数据。
对定量检测，以阳性对照样品的浓度的 log 值为横轴，以有效 Ct 值为纵轴，绘制标准曲线。再以待测样品的有效 Ct 值从标准曲线上推算出样品 DNA 浓度的 log 值，再换算出待测样品的 DNA 浓度。
对定性检测，则有有效 Ct 值的为阳性，无有效 Ct 值的为阴性。
羊痘病毒探针法荧光定量PCR试剂盒【注意事项】
1．PCR 操作各阶段应严格分区操作，避免交叉污染。
2．各组分不得与其他产品或不同批号的相应成分进行互换。
3．待测标本若不及时检测，应保存于-20℃或-70℃。
4．样品的处理应该严格按照生物安全规范操作。
5．PCR 操作人员应具有经验和受过专业培训。
6．本试剂盒仅用于科研使用，不做为临床诊断使用。
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所特有的，下游引物为通用引物就可以了。 荧光定量PCR检测方法有SYBR Green染料法和TaqMan探针法。前者需要调整引物浓度以及引物扩增效率，把引物二聚体调整到越小越好；探针法则需要设计荧光探针，这其中由于MGB探针需要碱基数量少和特异性好的特点而被推荐。 探针设计位置有3个：完全与miRNA序列相同、在miRNA与RT引物的交叉点、完全在RT引物上；这其中又有正向和反向互补两种情况。至于探针要设计在那个位置，根据自己试验情况而定，本人以为效果都差不多。 四、试验操作流程
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