BeyoClick™ EU-647 RNA合成检测试剂盒

碧云天BeyoClick™ EU-647 RNA合成检测试剂盒(BeyoClick™ EU RNA Synthesis Kit with Alexa Fluor 647)，是一种基于RNA合成过程中尿嘧啶核苷(Uridine)类似物EU (5-ethynyl-uridine)的掺入，并通过随后的点击反应(Click reaction)使EU被Alexa Fluor 647所标记，从而实现简单、快速、高灵敏地检测新合成RNA的试剂盒。

本试剂盒可以检测到活细胞或组织样品中新合成的RNA，而不检测DNA[1]。检测过程中不需要放射性同位素和抗体，只需要简单的两步反应即可完成。

经本试剂盒处理后，有RNA合成的细胞在荧光显微镜下呈现较强的远红外荧光，通常该荧光探针被激发后，肉眼不能观察到激发出来的长波长荧光，但可以被具有相应激发和发射检测模块的荧光显微镜、激光共聚焦显微镜、流式细胞仪或荧光酶标仪等所检测到，也可以用于高内涵筛选(High-content screening, HCS)。流式细胞仪或荧光酶标仪检测仅适用于细胞样品，不适用于组织切片。

EU (5-ethynyl-uridine)，中文名为5-炔基尿苷，是一种新型尿嘧啶核苷(Uridine)类似物，EU可以在RNA合成过程中替代尿苷掺入到新合成的RNA中。另一方面，EU上的乙炔基能与荧光标记的小分子叠氮化物探针(如Azide Alexa Fluor 488、Azide Alexa Fluor 555、Azide Alexa Fluor 594、Azide Alexa Fluor 647等)通过一价铜离子的催化发生共价反应，形成稳定的三唑环，该反应非常迅速高效，被称作点击反应(Click reaction)，其反应原理参见图1。通过点击反应，新合成的RNA会被相应的荧光探针所标记，从而可以使用适当的荧光检测设备检测到新合成RNA。

图1.碧云天BeyoClick™系列RNA合成检测试剂盒中的点击反应(Click reaction)原理图。荧光探针等标记的叠氮化物(Labeled Azide)与掺入到细胞RNA中的EU，在铜离子的催化发生共价反应，形成稳定的三唑环，最终使细胞RNA标记上荧光探针或其它探针。

本试剂盒反应简单、检测灵敏度高。本试剂盒基于简单高效的点击反应，无需特殊温度，只需少量的小分子叠氮化物探针即可非常有效地标记掺入的EU，并且可以检测到单个细胞的RNA合成情况。

本试剂盒使用便捷、兼容性好。本试剂盒只需常用的多聚甲`醛固定和Triton X-100穿透，就可以使叠氮化物探针有效进入细胞并发生点击反应，不会影响细胞形态，不会产生多余的附加产物，不会影响基于抗体的免疫荧光和免疫组化检测，也不会影响DNA的荧光染色(如PI染色检测细胞周期、DAPI或Hoechst染料检测细胞核等)。

本试剂盒检测快速。本试剂盒采用的BeyoClick™ EU法检测新合成的RNA仅需1.5-2小时。本试剂盒操作流程请参考图2。

图2.碧云天BeyoClick™系列RNA合成检测试剂盒实验操作流程图。

本试剂盒同时提供了染色细胞核的Hoechst 33342，以方便染色观察所有的细胞核。HeLa细胞用本试剂盒检测新合成RNA的效果参见图3。

图3.碧云天BeyoClick™ EU-647 RNA合成检测试剂盒(R0311)检测HeLa细胞新合成RNA的效果图。EU孵育2小时后检测，无EU组观察不到荧光(最左侧一列)；EU (1mM)组有较强的伪彩红色荧光(中间一列)；而用RNA合成抑制剂Actinomycin D (1μM)提前预处理0.5小时后，荧光显著减弱，说明RNA合成抑制后，EU的掺入被显著抑制(最右侧一列)。实际检测效果会因实验条件、检测仪器等的不同而存在差异，图中效果仅供参考。

本试剂盒小包装R0311S如果用于培养的细胞(6孔板)的检测，可以检测50个样品， 每个样品的反应体系为500μl的Click反应液；如果用于96孔板检测，可以检测500个样品，每个样品的检测体系为50μl的Click反应液；如果用于12孔、24孔、48孔或384孔板样品的检测，分别可以检测125、250、350和1250个样品，每个样品推荐的Click反应液用量为200μl、100μl、70μl和20μl；如果用于流式细胞仪检测，可以检测50个样品，每个细胞样品的细胞数量宜为10-100万，每个样品的反应体系为500μl的Click反应液；如果用于冰冻或石蜡切片的检测，可以检测125-250个样品， 每个样品的反应体系为100-200μl的Click反应液。大包装R0311L可检测样品的数量为小包装R0311S的4倍。

包装清单：

产品编号	产品名称	包装
R0311S-1	EU (100mM)	1.1ml
R0311S-2	Azide 647	55μl
R0311S-3	Click Reaction Buffer	30ml
R0311S-4	CuSO4	1.1ml
R0311S-5	Click Additive	2管
R0311S-6	Hoechst 33342 (1000X)	50μl
—	说明书	1份

 

产品编号	产品名称	包装
R0311L-1	EU (100mM)	4.4ml
R0311L-2	Azide 647	220μl
R0311L-3	Click Reaction Buffer	120ml
R0311L-4	CuSO4	4.4ml
R0311L-5	Click Additive	1瓶
R0311L-6	Hoechst 33342 (1000X)	200μl
—	说明书	1份

保存条件：

-20ºC保存，一年有效。Azide 647和Hoechst 33342须避光保存。

注意事项：

Click Additive配制成溶液后请注意适当分装冻存。如果溶解后有白色物质析出，请上下颠倒多次，待全部溶解后使用。如果该溶液颜色变成棕色，说明该组分的有效成分已失效，请弃用。

如果用于动物实验需要更多EU，可以从碧云天订购5-Ethynyl Uridine (EU) (≥98%, BioReagent) (ST2055)。

由于本产品需要铜离子催化进行点击反应，请注意如下的兼容性问题及解决方案。本产品完全兼容有机类染料如Alexa Fluor®系列普通染料及Fluorescein (FITC)、Allophycocyanin (APC)及APCE-tandems染料；对于Qdot®纳米晶体探针、Horseradish peroxidase (HRP)、R-phycoerythrin (R-PE)和R-PE-tandems染料如Alexa Fluor® 680-R-PE等，需要在点击反应完成后进行反应和检测；本产品会影响GFP、RFP、mCherry等荧光蛋白的荧光，对于荧光类蛋白如Green Fluorescent Protein (GFP)、TC-FlAsH™和TC-ReAsH™类试剂，需要在点击反应前进行反应和检测。由于Phalloidin (鬼笔环肽)不兼容点击反应，推荐使用Tubulin-Tracker Red (C1050)进行细胞微管的检测。

本产品仅限于专业人员的科学研究用，不得用于临床诊断或治疗，不得用于食品或药品，不得存放于普通住宅内。

为了您的安全和健康，请穿实验服并戴一次性手套操作。