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- 2025年10月11日
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- 详细信息
- 文献和实验
- 技术资料
- 库存：
100
- 英文名：
/
- 保质期：
1年
- 供应商：
上海晅科生物科技有限公司
- 保存条件：
-20℃
- 规格：
50次
荧光定量PCR( realtime fluorescence quantitative PCR，RTFQ PCR) 是1996 年由美国Applied Biosystems 公司推出的一种新定量试验技术，它是通过荧光染料或荧光标记的特异性的探针，对PCR产物进行标记跟踪，实时在线监控反应过程，结合相应的软件可以对产物进行分析，计算待测样品模板的初始浓度。为此本公司开发了简单快捷的转基因元件CaMV35终止子PCR试剂盒。
产品特点：
1. 即开即用，用户只需要提供 DNA 模板。
2. 引物经过精心优化，专一性强，只扩增转基因元件CaMV35终止子。
3. 提供阳性对照，便于区分假阴性样品。
4. PCR mix 中含上样染料，PCR 后可以直接上样电泳。
5. 本试剂盒足够做 40μL 体系的 PCR 50 次，但只能用于科研。
转基因元件CaMV35终止子PCR试剂盒包装规格及成分：
| 编号 |
成分 |
规格 |
| 试剂一 |
PCR MagicMix 3.0 | 1 mL（红盖） |
| 试剂二 |
超纯水 | 1 mL（亮黄色） |
| 试剂三 |
转基因元件CaMV35终止子PCR 引物混合液 | 100 μL（白盖） |
| 试剂四 |
转基因元件CaMV35终止子 PCR 阳性对照 （1×10E8 拷贝/μL） | 50 μL（黄盖） |
| 试剂五 |
使用手册 | 1 份 |
运输及保存：低温运输，-20℃保存，保存期限为一年。阳性对照需要单独放置，不要污染其 他试剂。
自备试剂：DNA 模板
使用方法：
一、样品 DNA 的制备
1. 用自选方法纯化 N+2 个样品的 DNA，本试剂盒跟市场上大多数核酸提取试剂盒兼容。
2. 如果有 N 个样品，则需要做 N+2 个提取，包括一个样品制备阳性对照和一 个样品制备阴性对照。样品制备阳性对照是在适量水（取决于试剂盒要求 的样品起始量）中加 10μL 转基因元件CaMV35终止子 PCR 阳性对照的 1000 倍稀释液 而得，样品制备阴性对照是直接用水。提取结束后最后得到模板 DNA 放冰 上待用。
二、设置 PCR 反应（40μL 体系）
3. 对 N+2 个样品，在 PCR 时需要增加一个 PCR 阳性对照和一个 PCR 阴性 对照，故需要设置 N+4 个反应。在 N+4 个 PCR 管中分别加入下列成分：
| 成分 | N+2 个 样品管 | PCR 阴性 对照 | PCR 阳性 对照 |
| PCR Magic Mix 3.0 | 各 20 μL | 20 μL | 20 μL |
| 转基因元件CaMV35终止子 PCR 引物 混合液 | 各 2 μL | 2 μL | 2 μL |
| N+2 个样品 DNA 模板 | 各 18 μL | ||
| PCR 阴性对照（水） | 18 μL | ||
| PCR 阳性对照（转基因元件CaMV35终止子PCR 阳性对照的 1000 倍稀释液） | 18 μL |
4. 按下表设置 PCR 反应：
| 过程 | 温度 | 时间 |
| 预变性 | 95℃ | 5 min |
| PCR 反应 （35 个循环） | 95℃ | 30 sec |
| 55℃ | 30 sec | |
| 72℃ | 30 sec | |
| 最后延伸 | 72℃ | 7 min |
三、电泳检测 5. 取 10-20 μL PCR 产物。1%琼脂糖凝胶电泳检测 PCR 产物。本产品提供的 PCR Mix 在扩增结束后可以直接上样，不需要另外再加 loading buffer。阳性对照必须有预期条带出现，阴性对照必须无任何扩增，否则实 验无效。对没有扩增产物的样品，可以稀释 10 倍后重复 PCR 扩增以排 除 PCR 抑制剂的感染。
转基因元件CaMV35终止子PCR试剂盒相关产品：
| 产品名称 |
方法 |
产品规格 |
价格 |
| 转基因元件CaMV35终止子LAMP试剂盒 | LAMP |
50次 |
2490 |
| 转基因元件CaMV35终止子PCR试剂盒 | PCR |
50次 |
1990 |
| 转基因元件CaMV35终止子染料法荧光定量PCR试剂盒 | 染料法 |
50次 |
2490 |
| 转基因元件CaMV35终止子探针法荧光定量PCR试剂盒 | 探针法 |
50次 |
2990 |
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文献和实验负面影响，望各位指教！ 针对蛋白表达量而言不会产生负面影响。 CaMV35S双启动子显著提高转基因在拟南芥中表达水平的研究 作 者： 郝林 曹军 Hao Lin CAO Jun 作者单位： 郝林,Hao Lin(沈阳师范学院生物系，沈阳 110034) 曹军,CAO Jun(中国科学院沈阳应用生态研究所，沈阳 110015) 本文由丁香园论坛提供，想了解更多有用的、有意思的前沿资讯以及酷炫的实验
源序列，这些序列通常不存在于野生型植物中。其中，这两个外源的DNA序列与花椰菜花叶病毒的35S启动子和根癌农杆菌的NOS终止子整合在一起。假如这两个序列的任一个被扩增出来，则表明外源基因已经转化入植物基因组中。原则上所有已批准的转基因农作物都是用含有这两个元件或其中任一个的构建载体转化的。对于一些在转基因构建载体中新使用的启动子和终止子序列的检测，逐渐成为科学家们关注的焦点。目前，已经设计了一些针对不同大小产物的引物对。表1为合成的引物序列，选择退火位点生成单一DNA片段，以便于结果的分析。PCR反应
子、根癌农杆菌胭脂碱合成酶基因（NOS）终止子、大肠杆菌K12菌株新霉素磷酸转移酶II（NPTII）基因。普通PCR检测结果表明，3种花卉6个样品中仅矮牵牛的1个样品含有这3种转基因成分，酶切鉴定结果验证了PCR产物为非假阳性。尝试以多重PCR同时检测转基因矮牵牛与对照阳性质粒中的2个或3个转基因成分，得到预期结果。 关键词： 多重PCR；35S启动子；NOS终止子；NPTII基因 中图分类号： S727-31；Q78 文献标识
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