本试剂盒仅供科研使用
土壤脂肪酶(S-LPS)活性试剂盒说明书
(货号:WS8330W 微板法 96 样)
一、产品简介:
脂肪酶(EC 3.1.1.3)是一种特殊的酯键水解酶,能催化天然油脂水解,,在食品、医药、洗
涤剂和皮革等许多工业领域中都有广泛的应用。
本试剂盒提供一种简单、快速的检测方法,以对硝基*酚酯作为底物,脂肪酶水解底物
产生具有颜色的对硝基*酚,在405nm波长下测定其吸光值,即可得出脂肪酶活力。
二、试剂盒的组成和配制:
试剂名称
规格
保存要求
备注
试剂一
A 液:μL×4 支
B 液:5mL×1 瓶
-20℃保存
临用前甩几下,使微量 A 液体落到底
部,再向每支 A 液中加入 1.2mLB 液,
混匀备用,用不完的试剂仍-20℃保存。
试剂二
液体 35mL×1 瓶
4℃保存
标准品
粉体 mg×1 支
4℃保存
若重新做标曲,则用到该标曲。
三、所需的仪器和用品:
酶标仪、96 孔板、低温离心机、可调式移液枪、冰和蒸馏水。
四、土壤脂肪酶(S-LPS)活性测定:
建议正式实验前选取 2 个样本做预测定,了解本批样品情况,熟悉实验流程,避免实验
样本和试剂浪费!
1、样本制备:
取新鲜土样或风干(可 37 度烘箱风干)土样,先粗研磨,过 40 目筛网备用。
【注】:土壤风干,减少土壤中水分对于实验的干扰;土壤过筛,保证取样的均匀细腻;
2、上机检测:
① 酶标仪预热 30 min,调节波长到 405 nm。
② 在 EP 管中依次加入:
试剂名称(
μL)
测定管
空白管(仅做一次)
土壤样本(
g)
0.1g
试剂一
40
40
试剂二
340
340
混匀,30℃条件振荡反应 20min,立即于 4℃,12000rpm
离心 10min,取出 200μL 上清液至 96 孔板中,于 405nm
处读取吸光值 A,△A=A 测定-A 空白。
【注】若ΔA 值在零附近,可以延长反应时间 T(如至 40min 或更长),或增加土壤样本量 W(如
增至 0.2g),则改变后的反应时间 T 和土壤样本质量 W 需代入公式重新计算。
五、结果计算:
1、标准曲线方程:y = 0.022x - 0.0066,x 是标准品摩尔质量(nmol),y 是ΔA。本试剂盒仅供科研使用
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2、酶活定义:每小时每克土样释放出 1nmol 对硝基*酚的酶量定义为一个酶活力单位。
S-LPS(nmol/h/g 干土) =[(△A+0.0066)÷0.022]÷W÷T=136.4×(△A+0.0066) ÷W
T---反应时间,20 min=1/3h;
W---土壤样本实际取样量,g。
附:标准曲线制作过程:
1 制备标准品母液(20μmol/mL):向标准品 EP 管里面加入 1ml 蒸馏水。
2 把母液稀释成以下浓度梯度的标准品:0, 0.8, 1.6, 2.4, 3.2, 4μmol/mL。也可根据实际
样本来调整标准品浓度。
3 在 96 孔板中加入:10μL 标准品+40μL 的 B 液+330μL 试剂二,混匀,于 405nm 下
读取吸光值,根据结果制作标准曲线。