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羟自由基清除能力生化检测试剂盒

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  • ¥192 - 360
  • 帛科
  • BKS2185
  • 国产
  • 2025年07月14日
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      详见说明书

    • 保质期

      6个月

    • 供应商

      帛科

    • 保存条件

      2-8℃冷藏

    • 规格

      100管/96样/50管/48样

    规格:100管/96样产品价格:¥360.0
    规格:50管/48样产品价格:¥192.0
    商品属性:
    产品名称 规格 实验类型 货号
    羟自由基清除能力生化检测试剂盒 50管/48样、100管/96样 可见分光光度法、微量法 BKS2185
    商品详情:
    羟自由基清除能力生化检测试剂盒测定意义:
    羟自由基作用于体内蛋白质、核酸、脂类等生物分子,造成细胞结构和功能受损,进而导致体内代谢紊乱引起疾病。羟自由基清除能力是样品抗氧化能力的重要指标之一,在抗氧化类保健品和药品研究中得到广泛应用。
    测定原理:
    H2O2/ Fe2+ 通过Fenton反应产生羟自由基,水杨酸能有效捕捉产生的羟自由基并与其反应生成有色物质2,3-二羟基苯甲酸,在510nm处有最大吸收峰,加入具有清除能力的物质后,有色物质便会减少,从而可以根据吸光值的数值判断样品清除羟自由基的能力。
    自备实验用品:
    恒温水浴锅、酶标仪、96孔板和蒸馏水。
    试剂组成和配制 :
    提取液:液体100mL×2瓶,4℃保存。  
    试剂一:液体10mL×1瓶,4℃避光保存。
    试剂二:粉剂×1瓶,-20℃避光保存。临用前加2mL蒸馏水充分溶解;用不完的试剂分装后-20℃保存,禁止反复冻融。
    试剂三:粉剂×1支,-20℃避光保存。临用前加1mL蒸馏水充分溶解;用不完的试剂分装后-20℃保存,禁止反复冻融。
    试剂四:粉剂×1支,-20℃避光保存。临用前加1 mL蒸馏水充分溶解;用不完的试剂分装后-20℃保存,禁止反复冻融。
    试剂五:粉剂×1瓶,-20℃避光保存。临用前加4 mL蒸馏水充分溶解;用不完的试剂分装后-20℃保存,禁止反复冻融。

     
    产品细节图片1
    产品细节图片2
    产品细节图片3
     
    酶液提取:
    ①总PGK酶提取:建议称取约0.1g样本,加入1mL提取液,冰浴匀浆后超声破碎(冰浴,200W,破碎3s,间歇7s,总时间1min),然后4℃,500g离心5min,取上清测定。
    ②胞浆和叶绿体PGK酶的分离:按照植物组织质量(g):提取液体积(mL)为1:5~10的比例(建议称取约0.1g样本,加入1mL提取液),冰浴匀浆后于4℃,500g离心5min,弃沉淀,取上清在4℃,8000g离心10min,取上清用于测定胞浆PGK酶活性,取沉淀加1mL提取液,震荡溶解后超声破碎(冰浴,200W,破碎3s,间歇7s,总时间1min),然后4℃,500g离心5min,取上清测定叶绿体中PGK酶活性。
    建议测定总PGK酶活性,按照步骤①提取粗酶液,若需要分别测定胞浆和叶绿体中的PGK,则按照步骤②提取粗酶液。
    测定操作
    分光光度计/酶标仪预热30min,调节波长至340nm,蒸馏水调零。
    取微量石英比色皿/96孔板,依次加入100μL试剂一,20μL试剂二,10μL试剂三,10μL试剂四,40μL试剂五,20μL粗酶液,充分混匀,记录340nm处10s的吸光值A1和310s的吸光值A2,△A=A1-A2
    计算公式
    羟自由基清除能力生化检测试剂盒用微量石英比色皿测定的计算公式如下
    (1)按照样本蛋白浓度计算
    酶活单位定义:每毫克组织蛋白每分钟消耗1 nmol的NADH定义为一个酶活力单位。
    PGK(nmol/min /mg prot)=ΔA÷(ε×d)×V反总÷(V样×Cpr) ÷T=321.54×ΔA÷Cpr
    (2)按照样本质量计算
    酶活单位定义:每克组织每分钟消耗1 nmol的NADH定义为一个酶活力单位。
    PGK(nmol/min /g 鲜重)=ΔA÷(ε×d)×V反总÷(W ×V样÷V样总) ÷T=321.54×ΔA÷W
    V反总:反应体系总体积,0.2mL;ε:NADH摩尔消光系数,6.22×103 L / mol /cm;d:比色皿光径,1cm;V样:加入样本体积,0.02mL;V样总:加入提取液体积,1mL;T:反应时间,5 min;Cpr:样本蛋白质浓度,mg/mL;W:样本质量,g
    用96孔板测定的计算公式如下
    (1)按照样本蛋白浓度计算
    酶活单位定义:每毫克组织蛋白每分钟消耗1 nmol的NADH定义为一个酶活力单位。
    PGK(nmol/min /mg prot)=ΔA÷(ε×d)×V反总÷(V样×Cpr) ÷T=643.08×ΔA÷Cpr
    (2)按照样本质量计算
    酶活单位定义:每克组织每分钟消耗1 nmol的NADH定义为一个酶活力单位。
    PGK(nmol/min /g 鲜重)=ΔA÷(ε×d)×V反总÷(W ×V样÷V样总) ÷T=643.08×ΔA÷W
    V反总:反应体系总体积,0.2mL;ε:NADH摩尔消光系数,6.22×103 L / mol /cm;d:比色皿光径,0.5cm;V样:加入样本体积,0.02mL;V样总:加入提取液体积,1mL;T:反应时间,5 min;Cpr:样本蛋白质浓度,mg/mL;W:样本质量,g
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