本试剂盒仅供科研使用
土壤锰过氧化物酶(S-Mnp)试剂盒说明书
(货号:WS0330F 分光法 24 样)
一、产品简介:
锰过氧化物酶(EC1.11.1.13,Mnp)是真菌分泌的一种糖基化的胞外蛋白,含亚铁血红
素的过氧化物酶,主要存在于引起白腐的木腐菌和土壤枯草菌这两个担子真菌中,属于木
质素降解酶系,能有效的降解木质素及废水和环境中其他一些抗性物质,如腐殖质酸和包
括多环芳烃在内的多种有机污染物等。
土壤锰过氧化物酶(S-Mnp)在 Mn2+存在的条件下,将二甲*基苯酚(DMP)氧化生成
的产物在 470nm 处有特征吸收峰。通过检测该产物在 470nm 处的增加速率,即可得到 Mnp
酶活性大小。
二、试剂盒组分与配制:
试剂名称
规格
保存要求
备注
试剂一
液体 30mL×1 瓶
4℃保存
试剂二
粉剂×1 瓶
4℃保存
用前甩几下使粉剂落入底部,再加
8mL 无水乙醇溶解备用。
试剂三
粉剂×1 瓶
4℃保存
用前甩几下使粉剂落入底部,再加
3mL 蒸馏水充分溶解备用。
试剂四
液体×1 支
4℃保存
用前甩几下使液体落入底部,准备
三个新的 EP 管:每管中加入 2µL 液
体,再加 1mL 蒸馏水混匀备用。
三、所需的仪器和用品:
可见分光光度计、1mL 玻璃比色皿(光径 1cm)、低温离心机、可调式移液器、天平、
恒温震荡培养箱。
四、土壤锰过氧化物酶(S-Mnp)活性测定:
建议正式实验前选取 2 个样本做预测定,了解本批样品情况,熟悉实验流程,避免实验
样本和试剂浪费!
1、样本制备:
取新鲜土样风干或者 37 度烘箱风干,先粗研磨,过 40 目筛备用。
【注】:土壤风干,减少土壤中水分对于实验的干扰;土壤过筛,保证取样的均匀细腻;
2、上机检测:
1 可见分光光度计预热 30min 以上,调节波长至 470nm,蒸馏水调零。
2 所有试剂至常温状态。
3 在 EP 管中依次加入:
试剂名称(
μL)
测定管
对照管
土样(
g)
0.1
0.1
试剂一
400
680
试剂二
280
试剂三
40
40
试剂四
80
80
充分混匀,于 30℃震荡反应 2h,于 12000rpm,
4℃离心 10min,
取全部上清液至 1mL 玻璃比色皿中,读取 470nm 处吸光值 A,本试剂盒仅供科研使用
2
△A=A 测定管- A 对照管(每个样本需做一个自身对照)。
【注】若△A 值较低,可加大土壤样本量或者延长反应时间,则改变后的样本质量
W 和反应时间 T 需代入计算公式重新计算。
五、结果计算:
酶活性定义:每克土壤每天氧化 1nmol 的 DMP 所需酶量为一个酶活力单位。
S-MnP 活性(nmol/d/g 土样)=(△A÷ε÷d)×109× V÷W÷T=174.5×△A÷W
ε---DMP 被氧化的产物的摩尔消光系数:55000L/mol/cm;
d---96 孔板光径,1cm;
V---反应总体积,8×10-4 L;
W---样本质量,g;
T---反应时间,2h=1/12d