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- 2025年07月16日
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细胞生长曲线的测定
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XSL
掌握绘制细胞生长曲线的原理和方法。
【细胞生长曲线的测定背景与原理】 生长曲线是测定细胞生长数的常用方法，也是判定细胞活力的重要指标，是培养细胞生物学特性的基本参数之一。一般细胞传代之后，经过短暂的悬浮后贴壁，随后渡过长短不同的潜伏期，即进入快速生长的指数生长期。在细胞达到饱和密度后，停止生长，进入平台期，然后退化衰亡。为了准确描述整个过程中细 胞数目的动态变化，需连续对细胞进行计数。通常计数6天。为精确起见，一般每次实验设3个平行重复。
【材料、试剂与仪器】
1、实验材料： Hela细胞系。
2、实验试剂： DMEM培养基（青霉素，链霉素，10%血清），0.25%胰蛋白酶溶液，台酚蓝染液。 3、 实验仪器： 超净工作台，CO2培养箱，倒置显微镜，微量移液器，血细胞计数板，培养瓶，离心管，移液管，废液缸，盖玻片，24孔板。
【方法与步骤】
1、取生长良好的细胞，用培养基制成细胞悬液后计数。根据细胞计数结果按5×104/mL作传代培养接种于24孔板中，共接种21孔细胞。1ml/孔。余下三孔可设传代培养的对照。
2、24h后每天记录细胞数目，每次取3孔细胞，分别进行计数。计算平均值。连续计数7d。细胞用胰酶消化后加入一定量的培养基，混匀制成细胞悬液。取少量悬液与台酚蓝1:1混合。取一干净的血细胞计数板， 盖上盖片，从盖片两边滴入细胞悬液使之充满计数板和盖片之间。注意滴液勿有气泡，也不能太多，否则会使盖片浮起而使细胞计数不准。
3、低倍镜下观察，活细胞不着色，台盼蓝着色的细胞呈深蓝色，是不健康或已死亡的细胞，不能计数。 找出计数板上的方格，计算四角大格内总细胞数，压大格线者只计左侧和上方，不计右侧和下方细胞悬液中细胞密度计算公式为：细胞数/mL=（四角大格内细胞数/4）×104×2
4、根据细胞计数结果，以单位细胞数（细胞数/mL）为纵坐标，以时间为横坐标绘制生长曲线。
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文献和实验1、 问：测定细胞生长曲线的意义是什么？ 答：细胞生长曲线是测定细胞绝对生长数的常用方法，也是判定细胞活力的重要指标，是培养细胞生物学特性的基本参数之一。因为细胞太小，无法测单个细胞的生长状态，所以测细胞群体的生长曲线。 2、 问：如何选择细胞接种数？ 答：可根据细胞传代培养过程中接种数及细胞生长周期进行计算，细胞接种数因细胞的不同而不同。 3、细胞计数时为什么要用台盼蓝染色？ 答：加入台盼蓝后，活细胞不着色，台盼蓝着色的细胞呈深蓝色，是不健康或已死亡的细胞，不能计数
生长速度间接来衡量生长状况。目前测定微生物数量的方法有直接法和间接法。直接法包括血球计数板法、涂片染色法、比浊法等；间接法又包括平皿菌落计数法、液体稀释法、薄膜过滤计数法等。测定细胞物质量的方法有定氮法测、DNA法、测定细胞干重法、测定细胞湿重法、生理指标测定法等。 为了学习微生物的生长规律，增进了解微生物生长旺、繁殖快的特点，以酵母、放线菌和黄瓜枯萎病菌作为实验材料，本实验采用了干/湿重法、血球计数法直接计数、比浊法以及菌丝长度测量法,测定了放线菌及黄瓜枯萎病菌的生长量和黄瓜枯萎病菌的生长曲线
linli_1986 有谁做过乳腺癌细胞MBA-MD-231细胞的生长曲线的吗？对数期是在第几天啊？ freecell http://202.194.11.26:8001/xwlw/document?RecordNo=2765&ColumnName=FREETEXT_URL&MultiNo=0&issource=yes&type=bin&channelid=65373 消失一会儿 http
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