Mouse FTO ELISA Kit

威奥生物生产的ELISA试剂盒采用“夹心法”:将捕获抗体包被于酶标板上，捕获样品及标准品中的靶蛋白，生物素化的检测抗体与靶蛋白结合， SABC复合物与生物素化检测抗体结合，形成免疫复合物，加入TMB显色液后，若反应孔中有靶蛋白则显蓝色，加入终止液变黄色，检测过程中游离的成分均被洗去，用酶标仪在498 nm处测OD值，靶蛋白浓度与OD值之间呈正比，通过绘制标准曲线计算出标本中靶蛋白的浓度。
品质高：凭借多年的生物试剂盒研发经验，提供高灵敏度、高特异性的ELISA检测试剂盒； 技术精：技术服务人员拥有丰富的操作经验和精湛的技术，严格操作，保证高效、精准地完成检测； 服务全：根据客户实验要求设计、制定实验方案，同时为客户提供专业的数据分析服务； 价格低：以优惠的价格为客户提供最全面的服务，

 

一、检测原理：

威奥生物生产的ELISA 试剂盒采用“夹心法”:将捕获抗体包被于酶标板上，捕获样品及标准品中的靶蛋白，生物素化的检测抗体与靶蛋白结合， SABC 复合物与生物素化检测抗体结合，形成免疫复合物，加入 TMB显色液后，若反应孔中有靶蛋白则显蓝色，加入终止液变黄色，检测过程中游离的成分均被洗去，用酶标仪在 450 nm 处测OD 值，靶蛋白浓度与OD 值之间呈正比，通过绘制标准曲线计算出标本中靶蛋白的浓度。

二、试剂盒组分: （保存温度 4℃）
 

名 称	规格（48 T）	规格（96 T）
预包被酶标板	8×6 条	8×12 条
标准品	1 支	1 支
标准品/样品稀释液	10ml	15ml
生物素化检测抗体（100×）	1 支	1 支
生物素化检测抗体稀释液	6ml	12ml
SABC 复合物	6ml	12ml
TMB 显色液（A/B）	各 3ml	各 6ml
终止液	6ml	12ml
20×浓缩洗涤液	30ml	60ml
封板胶纸	2 张	4 张
产品说明书	1 份	1 份

本试剂盒适用于血清、血浆、组织匀浆、细胞培养上清及其它生物体液。



 

三、试实验方法组分:

3.1样本收集及制备
1)血清：室温血液自然凝固 10-20 分钟后，离心 20 分钟左右（2000-3000 转/分）。仔细收集上清。-20°C 或者-80°C 冷冻保存。 
2)血浆：应根据试剂盒的要求选择 EDTA、柠檬酸钠或肝素作为抗凝剂，抗凝血离心 20 分钟左右（2000-3000 转/分）。仔细收集上清。-20°C 或者-80°C 冷冻保存。 
3)尿液、胸腹水、脑脊液、肺泡灌洗液：用无菌管收集。离心 20 分钟左右 （2000-3000 转/分）。仔细收集上清。-20°C 或者-80°C 冷冻保存。 
4)细胞培养上清：用于检测分泌性的成分，用无菌管收集。离心20分钟左右 （2000-3000 转/分）。仔细收集上清。
5)细胞沉淀：用于检测细胞内的成分，用 PBS 稀释细胞 悬液，细胞浓度达到 100 万/ml 左右。通过超声破碎或反复冻融(利用液氮和37ºC水浴对样品进行两到三次快速的冻融)，以使细胞破坏并放出细胞内成份。离心 20 分钟左右（2000-3000 转/分）。仔细收集上清（如需要可取部分进行BCA蛋白定量）。-20°C 或 者-80°C 冷冻保存。
6)组织标本：切割标本后，准确称取组织重量。按重量(g):体积(mL)=1:9的比例，加入9倍体积的匀浆介质PBS。用手工或匀浆器将标本匀浆充分。离心 20 分钟左右（2000-3000 转/分）。仔细收集匀浆上清（如需要可取部分进行BCA蛋白定量）。-20°C 或者-80°C 冷冻保存。
3.2.试剂准备
1)提前20分钟从冰箱中取出试剂盒，平衡至室温。读数前15分钟打开酶标仪预热。
2)洗涤液配置：用蒸馏水1:20稀释（例：1ml 浓缩洗涤液加入 19ml 的蒸馏水）。
3)标准品配制：取 8 个 1.5ml 离心管，分别标注 S1,S2,S3,S4,S5,S6，S7,blank,第一管 S1 中加入标准品/样品稀释液 900ul，第二至第八管中加入标准品/样品稀释液200ul，在第一管 S1中加入标准品溶液 100ul 置于漩涡混合器上混匀后用加样器吸出 200ul，移至第二管，如此反复作对倍稀释，从第七管中吸出 200ul弃去，第八管为空白对照。
4)生物素化抗体工作液配置:使用前 20 分钟，用生物素化抗体稀释液将 100×生物素 化抗体稀释成 1×工作液，根据所需用量配置，当日使用，剩余弃之。
5)SABC复合物工作液配置:使用前20分钟，用SABC复合物稀释液将100×浓缩ABC复合物稀释成1×工作液，当日使用，剩余弃之。
6)TMB 显色液的配置：使用前 10 分钟，将 TMB 显色液 A 液和 B 液 1：1 混合，避光放置备用。
3.3.检测程序总结
1)加样品及标准品，37℃反应 40 分钟。洗涤 5次。
2)加生物素化检测抗体，37℃反应 30 分钟。洗涤 5 次。
3)加 SABC复合物，37℃反应 20 分钟。洗涤 5 次。
4)加TMB显色液，37℃反应 10-20 分钟。
5）加入终止液，读数。
3.4结果判断与计算
1)所有OD值建议减除空白孔值后再进行计算，如空白孔OD低于0.1，也可以直接计算。
2)以标准品浓度作横坐标，OD 值作纵坐标，手工绘制或用软件绘制标准曲线，根据样品OD 值计算出相应含量，再乘以稀释倍数即可。

 检详细检测程序:

1. 加样：空白孔加入 50μl 标准品/样品稀释液，其余孔各加入标准品或待测样品 50ul，将反应板混匀后置 37℃， 40 分钟。
2. 洗板：用 1×洗涤液将反应板充分洗涤 4-6 次，每孔加入 1×洗液 350μl，每次震荡/浸泡 1-2 分钟，向滤纸上印干。
3. 空白孔加入 100ul 生物素化抗体稀释液，其余孔各加入 1×的生物素化抗体工作液 100ul，混匀后置 37℃，30分钟。
4. 洗板：同上。
5. 每孔加入 SABC 复合物工作液 100ul，混匀后置 37℃，20 分钟。
6. 洗板：同上。
7. 每孔加入提前配置好的 TMB 混合液 100ul，混匀后置 37 ℃暗处反应 10-20 分钟（具体显色时间根据显色结果而定）。
8. 每孔加入 100ul 终止液，混匀，30