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Human Thrombin ELISA Kit

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  • 上海闵行区
  • VEH10656
  • 2025年12月12日
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      1盒

    • 供应商

      上海威奥

    • 检测范围

      详情见说明书

    • 检测方法

      夹心法

    • 应用

      科研

    • 适应物种

    • 标记物

      详情见说明书

    • 样本

      血清/ 血浆/ 细胞培养上清/组织匀浆/其它生物体液

    • 规格

      48T///96T

    产品细节图片1
    威奥生物生产的
    ELISA试剂盒
    采用“夹心法”:将捕获抗体包被于酶标板上,捕获样品及标准品中的靶蛋白,生物素化的检测抗体与靶蛋白结合, SABC复合物与生物素化检测抗体结合,形成免疫复合物,加入TMB显色液后,若反应孔中有靶蛋白则显蓝色,加入终止液变黄色,检测过程中游离的成分均被洗去,用酶标仪在498 nm处测OD值,靶蛋白浓度与OD值之间呈正比,通过绘制标准曲线计算出标本中靶蛋白的浓度。
    品质高:凭借多年的生物试剂盒研发经验,提供高灵敏度、高特异性的ELISA检测试剂盒; 技术精:技术服务人员拥有丰富的操作经验和精湛的技术,严格操作,保证高效、精准地完成检测; 服务全:根据客户实验要求设计、制定实验方案,同时为客户提供专业的数据分析服务; 价格低:以优惠的价格为客户提供最全面的服务,


    产品细节图片2
     

    一、检测原理:

    威奥生物生产的ELISA 试剂盒采用“夹心法”:将捕获抗体包被于酶标板上,捕获样品及标准品中的靶蛋白,生物素化的检测抗体与靶蛋白结合, SABC 复合物与生物素化检测抗体结合,形成免疫复合物,加入 TMB显色液后,若反应孔中有靶蛋白则显蓝色,加入终止液变黄色,检测过程中游离的成分均被洗去,用酶标仪在 450 nm 处测OD 值,靶蛋白浓度与OD 值之间呈正比,通过绘制标准曲线计算出标本中靶蛋白的浓度。

    二、试剂盒组分: 保存温度 4℃)

     
    规格(48 T 规格(96 T
    预包被酶标板 8×6  8×12 
    标准 1  1 
    标准品/样品稀释液 10ml 15ml
    生物素化检测抗体100× 1  1 
    生物素化检测抗体稀释液 6ml 12ml
    SABC 复合 6ml 12ml
    TMB 显色液A/B) 3ml 6ml
    终止 6ml 12ml
    20×浓缩洗涤液 30ml 60ml
    封板胶 2  4 
    产品说明书 1  1 
    本试剂盒适用于血清、血浆、组织匀浆、细胞培养上清及其它生物体液


    产品细节图片3
     
    三、试实验方法组分:产品细节图片4

    3.1样本收集及制备
    1)血清:室温血液自然凝固 10-20 分钟后,离心 20 分钟左右(2000-3000 转/分)。仔细收集上清。-20°C 或者-80°C 冷冻保存。 
    2)血浆:应根据试剂盒的要求选择 EDTA、柠檬酸钠或肝素作为抗凝剂,抗凝血离心 20 分钟左右(2000-3000 转/分)。仔细收集上清。-20°C 或者-80°C 冷冻保存。 
    3)尿液、胸腹水、脑脊液、肺泡灌洗液:用无菌管收集。离心 20 分钟左右 (2000-3000 转/分)。仔细收集上清。-20°C 或者-80°C 冷冻保存。 
    4)细胞培养上清:用于检测分泌性的成分,用无菌管收集。离心20分钟左右 (2000-3000 转/分)。仔细收集上清。
    5)细胞沉淀:用于检测细胞内的成分,用 PBS 稀释细胞 悬液,细胞浓度达到 100 万/ml 左右。通过超声破碎或反复冻融(利用液氮和37ºC水浴对样品进行两到三次快速的冻融),以使细胞破坏并放出细胞内成份。离心 20 分钟左右(2000-3000 转/分)。仔细收集上清(如需要可取部分进行BCA蛋白定量)。-20°C 或 者-80°C 冷冻保存。
    6)组织标本:切割标本后,准确称取组织重量。按重量(g):体积(mL)=1:9的比例,加入9倍体积的匀浆介质PBS。用手工或匀浆器将标本匀浆充分。离心 20 分钟左右(2000-3000 转/分)。仔细收集匀浆上清(如需要可取部分进行BCA蛋白定量)。-20°C 或者-80°C 冷冻保存。
    3.2.试剂准备
    1)提前20分钟从冰箱中取出试剂盒,平衡至室温。读数前15分钟打开酶标仪预热。
    2)洗涤液配置:用蒸馏水1:20稀释(例:1ml 浓缩洗涤液加入 19ml 的蒸馏水)。
    3)标准品配制:取 8 个 1.5ml 离心管,分别标注 S1,S2,S3,S4,S5,S6,S7,blank,第一管 S1 中加入标准品/样品稀释液 900ul,第二至第八管中加入标准品/样品稀释液200ul,在第一管 S1中加入标准品溶液 100ul 置于漩涡混合器上混匀后用加样器吸出 200ul,移至第二管,如此反复作对倍稀释,从第七管中吸出 200ul弃去,第八管为空白对照。
    4)生物素化抗体工作液配置:使用前 20 分钟,用生物素化抗体稀释液将 100×生物素 化抗体稀释成 1×工作液,根据所需用量配置,当日使用,剩余弃之。
    5)SABC复合物工作液配置:使用前20分钟,用SABC复合物稀释液将100×浓缩ABC复合物稀释成1×工作液,当日使用,剩余弃之。
    6)TMB 显色液的配置:使用前 10 分钟,将 TMB 显色液 A 液和 B 液 1:1 混合,避光放置备用。
    3.3.检测程序总结
    1)加样品及标准品,37℃反应 40 分钟。洗涤 5次。
    2)加生物素化检测抗体,37℃反应 30 分钟。洗涤 5 次。
    3)加 SABC复合物,37℃反应 20 分钟。洗涤 5 次。
    4)加TMB显色液,37℃反应 10-20 分钟。
    5)加入终止液,读数。
    3.4结果判断与计算
    1)所有OD值建议减除空白孔值后再进行计算,如空白孔OD低于0.1,也可以直接计算。
    2)以标准品浓度作横坐标,OD 值作纵坐标,手工绘制或用软件绘制标准曲线,根据样品OD 值计算出相应含量,再乘以稀释倍数即可。

     检详细检程序:产品细节图片5

    1. 加样:空白孔加入 50μl 标准品/样品稀释液,其余孔各加入标准品或待测样品 50ul,将反应板混匀后置 37℃, 40 分钟。
    2. 洗板:用 洗涤液将反应板充分洗涤 4-6 次,每孔加入 洗液 350μl,每次震荡/浸泡 1-2 分钟,向滤纸上印干。
    3. 空白孔加入 100ul 生物素化抗体稀释液,其余孔各加入 1×的生物素化抗体工作液 100ul,混匀后置 37℃,30分钟。
    4. 洗板:同上。
    5. 每孔加入 SABC 复合物工作液 100ul,混匀后置 37℃,20 分钟。
    6. 洗板:同上。
    7. 每孔加入提前配置好的 TMB 混合液 100ul,混匀后置 37 ℃暗处反应 10-20 分钟(具体显色时间根据显色结果而定)。
    8. 每孔加入 100ul 终止液,混匀,30 

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