本试剂盒仅供科研使用
土壤蔗糖酶/酸性转化酶(Solid-Sucrase, S-SC)试剂盒说明书
(货号:WS2030W 微板法 96 样)
一、产品简介:
土壤蔗糖酶又叫土壤蔗糖转化酶,因其在酸性介质中活性最大,因此土壤中常测的蔗糖
酶亦是酸性转化酶。其对增加土壤中易溶性营养物质起着重要的作用,与土壤中的有机质、
氮、磷含量、微生物活动和土壤呼吸强度有关,一般情况下,土壤肥力越高,蔗糖酶活性
越强,因此该酶也是评价土壤熟化程度和肥力水平的一个指标。
本试剂盒采用 DNS 比色法,即土壤蔗糖酶催化蔗糖降解产生还原糖,进一步与 3,5-二
硝基水杨酸反应,生成有色氨基化合物,在 540nm 有特征光吸收,在一定范围内 540nm
光吸收增加速率与土壤蔗糖酶活性成正比。
二、试剂盒组分与配制:
试剂名称
规格试剂名称
保存要求
备注
试剂一
粉剂 mg×1 瓶
4℃保存
临用前用 60mL 试剂二混匀,备用
试剂二
液体 120 mL×1 瓶
4℃保存
试剂三
液体 50mL×1 瓶
4℃保存
标准品
粉剂 mg×1 支
4℃保存
若重新做标曲,则用到该试剂
三、所需的仪器和用品:
96 孔板、酶标仪、台式离心机、水浴锅/恒温培养箱、可调式移液器、蒸馏水、甲苯。
四、土壤蔗糖酶/酸性转化酶(S-SC)活性测定:
建议正式实验前选取 2 个样本做预测定,了解本批样品情况,熟悉实验流程,避免实验
样本和试剂浪费!
1、样本制备:
取新鲜土样或 37 度烘箱风干,先粗研磨,过 40 目筛网,备用。
2、上机检测:
① 培养:在 EP 管依次加入:
试剂(
μL)
测定管
对照管
土样(
g)
0.1g 鲜土/0.03g 干土 0.1g鲜土/0.03g干土
甲苯
30
30
试剂一
500
试剂二
500
混匀,于 37℃水浴锅或恒温培养箱中孵育 4 小时;
12000 rpm,4℃离心 5min,取上清液待测。
② 酶标仪预热 30min 以上,调节波长为 540nm。
③ 显色反应:在 EP 管中依次加入(先检测 2-5 个样本,参看注意事项,
依据ΔA 判定上清液是否稀释或增加):
试剂(
μL)
测定管
对照管
上清液
200
200
试剂三
200
200
混匀,95℃水浴 5min(可用封口膜缠紧,以防止水分散失),
取出后流水冷却至室温。
蒸馏水
500
500本试剂盒仅供科研使用
2
取 200μL 于 96 孔板中,540nm 处分别读取吸光值。
ΔA=A 测定管-A 对照管(每个测定管需设一个对照管)。
【注】:1.若ΔA 大于 1.5,则在显色反应阶段需减少孵育后得到的上清液体积(如减少为 50μL,则蒸馏
水相应增加),则改变后的 V1 需代入计算公式重新计算;或把孵育后得到的上清液稀释 2-5
倍再按照显色反应阶段操作表加样检测,则稀释倍数 D 需代入计算公式计算。
2.若ΔA 较小,可以延长 37℃的孵育时间(如 10 小时或 24 小时),或在显色反应阶段,上清液增
加到 400μL(蒸馏水相应减少)检测。则改变后的时间 T 或 V1 需代入计算公式重新计算。
五、结果计算:
1、标准曲线方程:y = 7.2432x - 0.0445;x 为标准品质量(mg),y 为ΔA。
2、酶活性定义:每天每克土样中产生 1mg 葡萄糖定义为一个酶活单位。
S-SC 活力(mg/d/g 土样)=[( ΔA+0.0445)÷7.2432×(V÷V1)]÷W÷T×D
=2.2×( ΔA+0.0445)÷W×D
V---反应总体积:530μL;
V1---显色反应中上清液体积:200μL;
T---反应时间,4h=1/6d;
W---土壤样本实际取样量,g;
D---稀释倍数,未稀释即为 1。
附:标准曲线制作过程:
1 制备标准品母液(
1mg/mL):从标准品管中称量取出 2mg 至一新 EP 管中,再加 2mL
蒸馏水混匀溶解即 1mg/mL 的葡萄糖(母液需在两天内用且-20℃保存)。
2 把母液用蒸馏水稀释成六个浓度梯度的标准品:0, 0.2, 0.4, 0.6, 0.8, 1 mg/mL。也可
根据实际样本来调整标准品浓度。
3 依据显色反应阶段加样体系操作,200μL 上清液换成标准品,以标准品的质量为横
坐标,吸光值为纵坐标,即可制作标准曲线。