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果胶裂解酶测试盒(可见分光光度法)

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  • 上海
  • 2026年05月29日
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    • 保质期

      3个月

    • 供应商

      上海烜雅生物科技有限公司

    • 保存条件

      详见说明书

    • 规格

      50管/24样

    果胶裂解酶(pectinate lyasesPL)试剂盒说明书
    分光光度法50/24

        :正式测定之前选择2-3个预期差异大的样本做预测定。
    测定意义
    果胶裂解酶(EC4.2.2.10)是果胶酶的重要组成部分,是一种能降解植物细胞壁,导致植物组织软化甚至死亡的解聚酶,来源比较广泛,主要来源于微生物,可用于果汁、果酒的澄清,提高水果出汁率,植物病毒的纯化,纸浆的漂白和纺织品的生物精炼,在减少环境污染和降低能源消耗方面具有潜在的应用价值。

    测定原理
    果胶裂解酶作用于果胶中的α-1,4糖苷键,生成在还原端C4C5之间位置具有不饱和键的不饱和寡聚半乳糖醛酸,在235nm处有特征吸收峰。

    自备实验用品及仪器
    天平、低温离心机、紫外分光光度计、1 mL石英比色皿、恒温水浴锅。

    试剂组成和配制
    提取液:液体50mL×1瓶,4℃保存。
    试剂一:液体15mL×1瓶,4℃保存。
    试剂二:液体15mL×1瓶,4℃保存。
    试剂三:液体15mL×1瓶,4℃保存。

    酶液提取
    1.组织:按照组织质量(g):提取液体积(mL)15~10的比例(建议称取约0.1g组织,加入1mL提取液),进行冰浴匀浆。10000g 4℃离心10min,取上清,置冰上待测。
    2.细菌、真菌:按照细胞数量(104个):提取液体积(mL)为500~10001的比例(建议500万细胞加入1mL提取液),冰浴超声波破碎细胞(功率300w,超声3秒,间隔7秒,总时间3min然后10000g,4℃离心10min取上清置于冰上待测。
    3. 培养液:直接测定。

    测定操作表
      对照管 测定管
    试剂一(μL   600
    试剂二(μL 600  
    40℃温育3min
    酶液(μL 100 100
    混匀,40℃反应30min
    试剂三(μL 300 300
    混匀,对照管调零,1mL石英比色皿测定235nm处吸光值A


    酶活性计算公式
    1. 组织中PL活性
    1)按照蛋白浓度计算
    酶活性定义:40℃,pH5.5条件下,每毫克蛋白每分钟分解果胶产生1nmol不饱和半乳糖醛酸所需的酶量为一个酶活单位。
    PL活性(nmol/min/mg prot= A÷ε×d×V反总÷V×Cpr÷T
    = 64.1×A÷Cpr
    2)按照样本质量计算
    酶活性定义:40℃,pH5.5条件下,每克组织每分钟分解果胶产生1nmol不饱和半乳糖醛酸所需的酶量为一个酶活单位。
    PL活性(nmol/min/g 鲜重)= A÷(ε×d×V反总÷V×W÷V样总)÷T
    = 64.1×A÷W
    2. 细胞PL活性
    酶活性定义:40℃,pH5.5条件下,每104个细胞每分钟分解果胶产生1nmol不饱和半乳糖醛酸所需的酶量为一个酶活单位。
    PL活性(nmol/min/104cell= A÷(ε×d×V反总÷V×细胞数量÷V样总)÷T 
        = 64.1×A÷细胞数量
    3. 培养液PL活性
    酶活性定义:40℃,pH5.5条件下,每毫升培养液每分钟分解果胶产生1nmol不饱和半乳糖醛酸所需的酶量为一个酶活单位。
    PL活性(nmol/min/mL= A÷(ε×d×V反总÷V÷T
    = 64.1×A
    ε:不饱和半乳糖醛酸摩尔消光系数:5200L/mol/cmd:比色皿光径,1cmV反总:反应总体积,1mLV样:反应体系中样本体积,0.1mLV样总:加入提取液体积,1mLCpr:样本蛋白浓度,mg/mLW,样本质量,gT:反应时间,30min
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