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100
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/
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3个月
- 供应商:
上海烜雅生物科技有限公司
- 保存条件:
详见说明书
- 规格:
50管/24样
分光光度法50管/24样
注 意 :正式测定之前选择2-3个预期差异大的样本做预测定。
测定意义:
果胶裂解酶(EC4.2.2.10)是果胶酶的重要组成部分,是一种能降解植物细胞壁,导致植物组织软化甚至死亡的解聚酶,来源比较广泛,主要来源于微生物,可用于果汁、果酒的澄清,提高水果出汁率,植物病毒的纯化,纸浆的漂白和纺织品的生物精炼,在减少环境污染和降低能源消耗方面具有潜在的应用价值。
测定原理:
果胶裂解酶作用于果胶中的α-1,4糖苷键,生成在还原端C4和C5之间位置具有不饱和键的不饱和寡聚半乳糖醛酸,在235nm处有特征吸收峰。
自备实验用品及仪器:
天平、低温离心机、紫外分光光度计、1 mL石英比色皿、恒温水浴锅。
试剂组成和配制:
提取液:液体50mL×1瓶,4℃保存。
试剂一:液体15mL×1瓶,4℃保存。
试剂二:液体15mL×1瓶,4℃保存。
试剂三:液体15mL×1瓶,4℃保存。
酶液提取:
1.组织:按照组织质量(g):提取液体积(mL)为1:5~10的比例(建议称取约0.1g组织,加入1mL提取液),进行冰浴匀浆。10000g ,4℃离心10min,取上清,置冰上待测。
2.细菌、真菌:按照细胞数量(104个):提取液体积(mL)为500~1000:1的比例(建议500万细胞加入1mL提取液),冰浴超声波破碎细胞(功率300w,超声3秒,间隔7秒,总时间3min);然后10000g,4℃离心10min,取上清置于冰上待测。
3. 培养液:直接测定。
测定操作表:
| 对照管 | 测定管 | |
| 试剂一(μL) | 600 | |
| 试剂二(μL) | 600 | |
| 40℃温育3min | ||
| 酶液(μL) | 100 | 100 |
| 混匀,40℃反应30min | ||
| 试剂三(μL) | 300 | 300 |
| 混匀,对照管调零,1mL石英比色皿测定235nm处吸光值A。 | ||
酶活性计算公式:
1. 组织中PL活性
(1)按照蛋白浓度计算
酶活性定义:在40℃,pH5.5条件下,每毫克蛋白每分钟分解果胶产生1nmol不饱和半乳糖醛酸所需的酶量为一个酶活力单位。
PL活性(nmol/min/mg prot)= A÷(ε×d)×V反总÷(V样×Cpr)÷T
= 64.1×A÷Cpr
(2)按照样本质量计算
酶活性定义:在40℃,pH5.5条件下,每克组织每分钟分解果胶产生1nmol不饱和半乳糖醛酸所需的酶量为一个酶活力单位。
PL活性(nmol/min/g 鲜重)= A÷(ε×d)×V反总÷(V样×W÷V样总)÷T
= 64.1×A÷W
2. 细胞PL活性
酶活性定义:在40℃,pH5.5条件下,每104个细胞每分钟分解果胶产生1nmol不饱和半乳糖醛酸所需的酶量为一个酶活力单位。
PL活性(nmol/min/104cell)= A÷(ε×d)×V反总÷(V样×细胞数量÷V样总)÷T
= 64.1×A÷细胞数量
3. 培养液PL活性
酶活性定义:在40℃,pH5.5条件下,每毫升培养液每分钟分解果胶产生1nmol不饱和半乳糖醛酸所需的酶量为一个酶活力单位。
PL活性(nmol/min/mL)= A÷(ε×d)×V反总÷V样÷T
= 64.1×A
ε:不饱和半乳糖醛酸摩尔消光系数:5200L/mol/cm;d:比色皿光径,1cm;V反总:反应总体积,1mL;V样:反应体系中样本体积,0.1mL;V样总:加入提取液体积,1mL;Cpr:样本蛋白浓度,mg/mL;W,样本质量,g;T:反应时间,30min
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文献和实验问:我最近想测量果汁中果胶酶的活性,通过查资料发现比较常用的方法为PH-stat法,但该方法要用自动电位滴定仪,该仪器很贵,各位有没有更好的方法,或者谁有这个仪器,我现在和着急,恳请各位的 帮助,多谢!答:果胶酶包含的酶组分为:对果胶作用的解聚酶分为a:聚甲基半乳糖醛酸酶(PMG),有内切、外切两种酶系(EC.3.2.1.41);b:聚甲基半乳糖醛酸裂解酶(PMGL),分内切、外切两种酶系(EC.4.2.2.3),果胶酸解聚酶:a:聚半乳糖醛酸酶(PG),分内切(EC.3.2.1.15
来自黑曲霉的糖化酶可用于淀粉、酿造、果汁加工。 5. 精制果胶酶(11.005) 编辑本段 回目录 5.1 概述 本品为果胶甲酯酶、果胶裂解酶、果胶解聚酶的复合物。浅黄色粉末,无结块,易溶于水。液体果胶酶制剂为棕褐色,允许微浊或有少许凝聚物。可分别对果胶质起解脂作用,产生甲醇和果胶酸。水解作用产生半乳糖醛酸和低聚半乳糖醛酸。 5.2 作用 酶制剂。 5.3 安全性 小鼠骨髓细胞染色体畸变试验、小鼠骨骸微核试验,均无致突变作用。 5.4 使用
。在选择性培养基中加入碳酸钙,使平板成混状,将样品悬浮液涂抹到平板上进行培养,由于产生菌能够把菌落周围的碳酸钙水解,形成清晰的透明圈,可以轻易地鉴别出来。分离乳酸产生菌时,由于乳酸是一种较强的有机酸,因此,在培养基中加入的碳酸钙不仅有鉴别作用,还有酸中和作用。2. 变色圈法 对于一些不易产生透明圈产物的产生菌,可在底物平板中加入指示剂或显色剂,使所需微生物能被快速鉴别出来。如筛选果胶酶产生菌时,用含0.2%果胶为惟一碳源的培养基平板,对含微生物样品进行分离,待菌落长成后,加入0.2%刚果红溶液染色











