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- xybio
- XY-sh0761
- 上海
- 2025年07月28日
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- 详细信息
- 文献和实验
- 技术资料
- 库存：
100
- 英文名：
/
- 保质期：
3个月
- 供应商：
上海烜雅生物科技有限公司
- 保存条件：
详见说明书
- 规格：
50管/48样
分光光度法50管/48样
注 意：正式测定之前选择2-3个预期差异大的样本做预测定。
测定意义：
维生素B6（Vitamin B6）又称吡哆素，其包括吡哆醇、吡哆醛及吡哆胺，在体内以磷酸酯的形式存在，是一种水溶性维生素，在细胞中参与多种蛋白质和氨基酸的代谢，对生物体具有极其重要的作用。
测定原理：
VB6与4-氨基安替比林在强氧化剂作用下生成稳定的黄色化合物，在390nm有特征吸收峰。
自备实验用品及仪器：
天平、研钵、离心机、可见分光光度计、恒温水浴锅、1 mL玻璃比色皿、蒸馏水。
试剂组成和配制 ：
提取液：液体35mL×1瓶，4℃保存。
试剂一：液体1mL×1瓶，4℃保存。
试剂二：液体12mL×1瓶，4℃保存。
试剂三：液体18mL×1瓶，4℃避光保存。
试剂四：液体18mL×1瓶，4℃避光保存。
样本处理：
- 组织：将样品磨碎，按照质量（g）：提取液体积(mL)为1：5~10的比例（建议称取约0.1g，加入0.6mL提取液）加入提取液，60℃浸提30min，加蒸馏水0.4mL，混匀后于25℃，16000rpm离心10min，取上清测定（动物组织等蛋白含量较高的样本建议离心20-30分钟）。
- 细胞：按照细胞数量（104个）：提取液体积（mL）为500~1000：1的比例（建议500万细胞加入0.6mL提取液），冰浴超声波破碎细胞（功率300w，超声3秒，间隔7秒，总时间3min）；加蒸馏水0.4mL，混匀后于25℃，16000rpm离心10min，取上清测定。
- 血清：直接测定。
测定操作：
| 空白管 | 测定管 | |
| 样品（μL） | 200 | |
| 试剂一（μL） | 200 | |
| 试剂二（μL） | 200 | 200 |
| 试剂三（μL） | 300 | 300 |
| 试剂四（μL） | 300 | 300 |
| 充分混匀，25℃反应20min，于1mL玻璃比色皿，蒸馏水调零，测定390nm处吸光值，记为A空白管和A测定管，△A=A测定管-A空白管。空白管只要做一管。 | ||
计算公式：
标准曲线：y = 0.3635x+0.0205，R2 = 0.9986
1. 按照蛋白含量计算
VB6含量（μg/mg prot）=（△A - 0.0205）÷ 0.3635×V反总÷（V样×Cpr）
= 13.76×（△A - 0.0205）÷ Cpr
2. 按照样本质量计算
VB6含量（μg/g）=（△A - 0.0205）÷ 0.36359 ×V反总÷（V样×W÷V样总）
= 13.76×（△A - 0.0205）÷ W
3. 按照细胞数量计算
VB6含量（μg/104 cell）=（△A - 0.0205）÷ 0.3635×V反总÷（V样×细胞数量÷V样总）
= 13.76×（△A - 0.0205）÷ 细胞数量
4. 按照液体体积计算
VB6含量（μg/mL）=（△A - 0.0205）÷ 0.3635×V反总÷V样
=13.76×（△A - 0.0205）
V反总：反应总体积，1mL；：V样：加入样本体积，0.2mL；V样总：加入提取液体积，1mL； Cpr：蛋白浓度，mg/mL；W：样本质量，g
注意事项：
- 若测定结果中吸光值超过1，请将样本稀释后进行测定，并在计算公式中乘以稀释倍数。
- 蛋白浓度较高的样品，比如动物组织，若显色完成后有沉淀产生，将样本稀释后再测定，在计算公式中乘以稀释倍数。
- 显色完成后立即进行测定。
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文献和实验一、检测原理 Caspase (Cysteine-requiring Aspartate Protease)是在细胞凋亡过程中起重要作用的蛋白酶家族。Caspase在正常状态下以酶原的形式存在于胞浆中，没有活性；在细胞发生凋亡阶段，Caspase被激活，活化的Caspase可裂解相应的胞浆胞核底物，最终导致细胞凋亡。 Caspase分光光度法检测试剂盒的原理是将Caspase序列特异性的多肽偶联至黄色发光基团pNA (p-nitroaniline)。当该底物被活化的Caspase剪切后，黄色
(7)式或(9)式可计算叶绿素总量。 叶绿体色素的提取液中除含有叶绿素a与b外，还含有叶黄素和胡萝卜素，因为叶黄素和胡萝卜素的吸收光谱均在蓝光区，故不会干扰叶绿素含量在红光区的分光光度法测定。 器材与试剂 722分光光度计，叶绿体色素提取所需器材。 方法与步骤 1. 提取叶绿素。 2. 测定光密度。 在1cm比色杯中，注入叶绿素提取液(浓度大时需稀释)。另以叶绿素提取介质作为参比溶液注入同样的比色杯中。根据实验要求，选用相应的波长(测总量选用652nm，测叶绿素a、b含量
度。 （2） 吸收系数法 按各品种项下的方法配制供试品溶液，在规定的波长处测定其吸收度，再以该品种在规定条件下的吸收系数计算含量。用本法测定时，应注意仪器的校正和检定。 （3） 计算分光光度法 采用计算分光光度法应慎重。本法有多种，使用时均应按各品种项下规定的方法进行。当吸收度处在吸收曲线的陡然上升或下降的部位测定时，影响精度的因素较多，故对照品和供试品测试条件应尽可能一致。若测定时不用对照品，如维生素A测定法，则应在测定时对仪器作仔细的校正和检定。
