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- 上海
- 2025年07月24日
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3个月
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上海烜雅生物科技有限公司
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详见说明书
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50管/48样
土壤碱性磷酸酶（soil alkaline phosphatase，S-AKP/ALP）活性测定试剂盒说明书
分光光度法50管/48样
注 意：正式测定之前选择2-3个预期差异大的样本做预测定。
测定意义：
土壤磷酸酶是一类催化土壤有机磷化合物矿化的酶，其活性的高低直接影响着土壤中有机磷的分解转化及其生物有效性，是评价土壤磷素生物转化方向与强度的指标。土壤磷酸酶受到土壤碳、氮含量、有效磷含量和pH显著影响。通常按照其最适pH范围，分为碱性、中性和酸性三种类型磷酸酶。
测定原理：
碱性环境中，S-AKP/ALP催化磷酸苯二钠水解生成苯酚和磷酸氢二钠，通过测定酚的生成量即可计算出S-AKP/ALP活性。
自备仪器和用品：
可见分光光度计、台式离心机、37℃恒温培养箱、分析天平、可调式移液器、1mL玻璃比色皿、冰、蒸馏水、无水乙醇和甲苯。
试剂组成和配制：
试剂一：液体×1瓶，4℃避光保存。
试剂二：粉剂×1瓶，4℃保存。用前加50mL蒸馏水充分溶解。
试剂三：液体×1瓶，4℃保存。
试剂四：粉剂×1瓶，4℃避光保存。临用前加1152μL无水乙醇（自备），48 μL蒸馏水充分溶解。（变褐色后不能再使用）
标准品：液体×1瓶，0.5μmol/mL苯酚标准液，4℃保存。
催化反应：
称取风干混匀土壤约0.1g，加入50μL甲苯（自备），轻摇15min；加400μL试剂一并且摇匀后，置于37℃恒温培养箱，开始计时，催化反应24h；到时后迅速加入1mL试剂二充分混匀，以终止酶催化的反应。8000g，25℃离心10min，取上清液置于冰上待测。
显色反应：
1. 分光光度计预热30 min，调节波长到660 nm，蒸馏水调零。
2. 空白管：取1mL玻璃比色皿，加入50 μL蒸馏水，100 μL试剂三，20 μL试剂四，充分混匀，显色后再加蒸馏水830 μL，混匀后25℃静置30 min，于660 nm测定吸光度，记为A空白管。
3. 标准管：取1mL玻璃比色皿，加入50 μL标准液，100 μL试剂三，20 μL试剂四，充分混匀，显色后再加蒸馏水830 μL，混匀后25℃静置30 min，于660 nm测定吸光度，记为A标准管。
4. 测定管：取1mL玻璃比色皿，加入50 μL上清液，100 μL试剂三，20 μL试剂四，充分混匀，显色后再加蒸馏水830 μL，混匀后25℃静置30 min，于660 nm测定吸光度，记为A测定管。
注意：空白管和标准管只需测定一次。
S-ALP活性计算公式：
活性单位定义：37℃中每克土壤每天释放1μmol酚为1个酶活单位。
S-AKP/ALP（μmol/d/g土样）=[C标准液×(A测定管－A空白管)÷(A标准管－A空白管)]×V总÷W÷T
= 0.725×(A测定管－A空白管)÷(A标准管－A空白管)÷W
C标准液：0.5μmol/mL；V总：催化体系总体积，1.45mL；W：土壤样品质量，g；T：催化反应时间，24 h=1 d。
分光光度法50管/48样
注 意：正式测定之前选择2-3个预期差异大的样本做预测定。
测定意义：
土壤磷酸酶是一类催化土壤有机磷化合物矿化的酶，其活性的高低直接影响着土壤中有机磷的分解转化及其生物有效性，是评价土壤磷素生物转化方向与强度的指标。土壤磷酸酶受到土壤碳、氮含量、有效磷含量和pH显著影响。通常按照其最适pH范围，分为碱性、中性和酸性三种类型磷酸酶。
测定原理：
碱性环境中，S-AKP/ALP催化磷酸苯二钠水解生成苯酚和磷酸氢二钠，通过测定酚的生成量即可计算出S-AKP/ALP活性。
自备仪器和用品：
可见分光光度计、台式离心机、37℃恒温培养箱、分析天平、可调式移液器、1mL玻璃比色皿、冰、蒸馏水、无水乙醇和甲苯。
试剂组成和配制：
试剂一：液体×1瓶，4℃避光保存。
试剂二：粉剂×1瓶，4℃保存。用前加50mL蒸馏水充分溶解。
试剂三：液体×1瓶，4℃保存。
试剂四：粉剂×1瓶，4℃避光保存。临用前加1152μL无水乙醇（自备），48 μL蒸馏水充分溶解。（变褐色后不能再使用）
标准品：液体×1瓶，0.5μmol/mL苯酚标准液，4℃保存。
催化反应：
称取风干混匀土壤约0.1g，加入50μL甲苯（自备），轻摇15min；加400μL试剂一并且摇匀后，置于37℃恒温培养箱，开始计时，催化反应24h；到时后迅速加入1mL试剂二充分混匀，以终止酶催化的反应。8000g，25℃离心10min，取上清液置于冰上待测。
显色反应：
1. 分光光度计预热30 min，调节波长到660 nm，蒸馏水调零。
2. 空白管：取1mL玻璃比色皿，加入50 μL蒸馏水，100 μL试剂三，20 μL试剂四，充分混匀，显色后再加蒸馏水830 μL，混匀后25℃静置30 min，于660 nm测定吸光度，记为A空白管。
3. 标准管：取1mL玻璃比色皿，加入50 μL标准液，100 μL试剂三，20 μL试剂四，充分混匀，显色后再加蒸馏水830 μL，混匀后25℃静置30 min，于660 nm测定吸光度，记为A标准管。
4. 测定管：取1mL玻璃比色皿，加入50 μL上清液，100 μL试剂三，20 μL试剂四，充分混匀，显色后再加蒸馏水830 μL，混匀后25℃静置30 min，于660 nm测定吸光度，记为A测定管。
注意：空白管和标准管只需测定一次。
S-ALP活性计算公式：
活性单位定义：37℃中每克土壤每天释放1μmol酚为1个酶活单位。
S-AKP/ALP（μmol/d/g土样）=[C标准液×(A测定管－A空白管)÷(A标准管－A空白管)]×V总÷W÷T
= 0.725×(A测定管－A空白管)÷(A标准管－A空白管)÷W
C标准液：0.5μmol/mL；V总：催化体系总体积，1.45mL；W：土壤样品质量，g；T：催化反应时间，24 h=1 d。
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土壤碱性磷酸酶（SAKP/ALP）测试盒（可见分光光度法）
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卟啉，称辅基，最大吸收光谱为403nm，而其余非活性的酶蛋白部分吸收光谱为275nm，HRP的纯度是用二者的光密度比值(Od 403/275)衡量，Reinheit Zahl (RZ)表示。一般认为，标记酶的RZ值为3.0左右，不应小于2.8，RZ值越小，酶的纯度越差，例如RZ值为0.6的酶，含非活性的酶蛋白量高达75%。对于纯度低、质量差的酶，需纯化后使用。 除HRP外，碱性磷酸酶(Alkaline phasphotase, ALP)和葡萄糖氧化酶(Glucose oxidase
原理是利用酶对其相应底物的水解、氧化等作用，然后再使底物的反应产物与某种捕获剂发生反应，形成沉淀或有色的最终产物，借此检测该酶在组织切片或细胞内的分布及活性强弱。如细胞的磷酸酶是一种重要的水解酶，碱性磷酸酶（ALP）和酸性磷酸酶（ACP）在合适的pH条件下可水解有机磷酸脂。小肠上皮细胞表面的纹状缘和肾近曲小管表面的刷状缘处，微绒毛含有丰富的ALP，与物质的吸收和转运功能相关；许多细胞的溶酶体内则含大量ACP，参与细胞内物质代谢。这两种酶均可以β－甘油磷酸钠为底物，底物被水解产生磷酸根，再以Ca
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