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- 详细信息
- 文献和实验
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100
- 英文名:
/
- 保质期:
3个月
- 供应商:
上海烜雅生物科技有限公司
- 保存条件:
详见说明书
- 规格:
50管/48样
分光光度法50管/48样
注 意 :正式测定之前选择2-3个预期差异大的样本做预测定。
测定意义:
TC包括游离胆固醇和胆固醇酯。TC是指组织中所有脂蛋白所含胆固醇之总和。
测定原理:
利用酯酶催化胆固醇酯水解生成游离胆固醇(FC)和游离脂肪酸(FFA),从而把胆固醇酯转化为FC;进一步利用胆固醇氧化酶催化FC氧化,生成△4-胆甾烯酮和H2O2;最后利用过氧化物酶催化H2O2氧化4-氨基安替比林和酚,生成红色醌类化合物;在500nm有特征吸收峰,其颜色深浅与TC含量成正比。
自备仪器和用品:
可见分光光度计、水浴锅、可调式移液枪、1mL玻璃比色皿、异丙醇和蒸馏水。
试剂组成和配制:
试剂一:异丙醇50mL(自备)。
试剂二:液体50mL×1瓶,4℃保存;
试剂三:粉剂×1瓶,4℃保存;
试剂四:液体100μL×1瓶,4℃保存
TC标准品:液体1mL×1支,0.5μmol/mL,4℃保存。
TC的提取:
1、组织中TC的提取:按照组织质量(g):试剂一体积(mL)为1:5~10的比例(建议称取约0.1g组织,加入1mL试剂一)进行冰浴匀浆,8000g 4℃离心10min,取上清,即TC待测液。
2、细胞、细菌中TC的提取:先收集400-500万细胞或细菌到离心管内,弃上清,加1mL试剂一,超声波破碎1min(强度20%,超声2s,停1s),即TC待测液。
3、血清(浆)等样品:直接测定。
测定操作:
1. 分光光度计预热30 min,调节波长到500 nm,蒸馏水调零。
2. TC工作液的配制:临用前,吸取约0.8mL试剂二分别加入试剂三和试剂四瓶中,充分溶解后再全部转移回试剂二瓶中,充分混匀,TC工作液置于37℃水浴10min。用不完的工作液4℃保存一周。
3. 标准管:依次在1mL玻璃比色皿中加入100μL FC标准液和900μL TC工作液,混匀,37℃静置3h后于500nm测定A标准管。
4. 测定管:依次在1mL玻璃比色皿中加入100μL FC待测液和900μL TC工作液,混匀,37℃静置3h后于500nm测定A测定管。
5. 空白管:依次在1mL玻璃比色皿中加入100μL 试剂一和900μL TC工作液,混匀,37℃静置3h后于500nm测定A测定管。
注意:标准管和空白管只需测定一次。
计算公式:
1. 血清(浆)中TC含量:
TC(μ mol /dL)= C标准液×(A测定管-A空白管)÷(A标准管-A空白管)×100
= 50×(A测定管-A空白管)÷(A标准管-A空白管)
C标准液:0.5μmol/mL;100 mL:1dL=100 mL。
2. 组织中TC含量:
(1)按样本蛋白浓度计算
TC(μ mol/mg prot)= C标准液×(A测定管-A空白管)÷(A标准管-A空白管)÷Cpr
= 0.5×(A测定管-A空白管)÷(A标准管-A空白管)÷Cpr
(2)按样本质量计算
TC(μ mol / g鲜重)= C标准液×(A测定管-A空白管)÷(A标准管-A空白管)÷W
= 0.5×(A测定管-A空白管)÷(A标准管-A空白管)÷W
C标准液:0.5μmol/mL;样本蛋白浓度,mg/mL;W:样本质量,g/mL
3. 细胞、细菌中TC含量:
TC(μ mol /104 cell)= C标准液×(A测定管-A空白管)÷(A标准管-A空白管)÷细菌或细胞(104 cell /L)
= 0.5×(A测定管-A空白管)÷(A标准管-A空白管)÷细菌或细胞(104 cell /L)
C标准液:0.5μmol/mL。
注意事项:
最低检出限为1nmol/mL。
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文献和实验(7)式或(9)式可计算叶绿素总量。 叶绿体色素的提取液中除含有叶绿素a与b外,还含有叶黄素和胡萝卜素,因为叶黄素和胡萝卜素的吸收光谱均在蓝光区,故不会干扰叶绿素含量在红光区的分光光度法测定。 器材与试剂 722分光光度计,叶绿体色素提取所需器材。 方法与步骤 1. 提取叶绿素。 2. 测定光密度。 在1cm比色杯中,注入叶绿素提取液(浓度大时需稀释)。另以叶绿素提取介质作为参比溶液注入同样的比色杯中。根据实验要求,选用相应的波长(测总量选用652nm,测叶绿素a、b含量
吸收峰。据此所测得的吸光度值代人不同的经验公式(见结果计算),计算出叶绿体色素丙酮(或乙醇)提取液中叶绿素 a 和 b 的浓度及其叶绿素总浓度和类胡萝卜素的总浓度,并依据所使用的单位植物组织(鲜重、干重或面积),求算出色素的含量。 [ 实验目的 ] 掌握分光光度法对植物叶绿体色素提取液中叶绿素 a 和 b 的浓度及其叶绿素总浓度和类胡萝卜素的总浓度测定与计算方法,以及植物材料中各种色素含量的求算方法。 [ 器材和试剂 ] 1 .植物材料 新鲜(或烘干)植物叶片,如菠菜叶片等。 2 .实验
、45.6为叶绿素a、b在波长645nm时的比吸收系数。解方程式(1)(2),则得:此时,CT为总叶绿素浓度,CA 、CB为叶绿素a、b的浓度,单位为每升毫克,利用上面(3)(4)(5)式,即可以计算a、b总叶绿素的浓度。二、仪器药品 扭力天平 剪刀 研钵 移液管 漏斗 大试管 丙酮 碳酸钙 石英砂 721型分光光度计(如有其他精密型号的分光光度计则更好)三、实验步骤 1、提取叶绿素从植株上选取有代表性的叶片数张,于扭力天平上称取0.1g鲜重,剪碎后置于研钵中,加蒸馏水5-6ml,碳酸钙少许及适量











