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总胆固醇(TC)含量测试盒(可见分光光度法)

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  • 上海
  • 2026年03月11日
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    • 保质期

      3个月

    • 供应商

      上海烜雅生物科技有限公司

    • 保存条件

      详见说明书

    • 规格

      50管/48样

    总胆固醇(total cholesterolTC)含量测定试剂盒说明书
                                                 
                                                      分光光度法50/48

        正式测定之前选择2-3个预期差异大的样本做预测定。
    测定意义:
    TC包括游离胆固醇和胆固醇酯。TC是指组织中所有脂蛋白所含胆固醇之总和。

    测定原理:
    利用酯酶催化胆固醇酯水解生成游离胆固醇(FC)和游离脂肪酸(FFA),从而把胆固醇酯转化为FC;进一步利用胆固醇氧化酶催化FC氧化,生成△4-胆甾烯酮和H2O2;最后利用过氧化物酶催化H2O2氧化4-氨基安替比林和酚,生成红色醌类化合物;在500nm有特征吸收峰,其颜色深浅与TC含量成正比。

    自备仪器和用品:
    可见分光光度计、水浴锅、可调式移液枪、1mL玻璃比色皿、异丙醇和蒸馏水。

    试剂组成和配
    试剂一:异丙醇50mL(自备)。
    试剂二:液体50mL×1瓶,4℃保存
    试剂三粉剂×1瓶,4℃保存
    试剂四:液体100μL×1瓶,4℃保存
    TC标准品:液体1mL×1支,0.5μmol/mL4℃保存。

    TC的提取:
    1、组织中TC的提取:按照组织质量(g):试剂一体积(mL)15~10的比例(建议称取约0.1g组织,加入1mL试剂一)进行冰浴匀浆,8000g 4℃离心10min,取上清,即TC待测液。
    2、细胞、细菌中TC的提取:先收集400-500万细胞或细菌到离心管内,弃上清,加1mL试剂一,超声波破碎1min(强度20%,超声2s,停1s,即TC待测液。
    3、血清(浆)等样品:直接测定。

    测定操作:
    1. 分光光度计预热30 min,调节波长到500 nm,蒸馏水调零。
    2. TC工作液的配制:临用前,吸取约0.8mL试剂二分别加入试剂三和试剂四瓶中,充分溶解后再全部转移回试剂二瓶中,充分混匀,TC工作液置于37℃水浴10min用不完的工作液4℃保存一周。
    3. 标准管:依次在1mL玻璃比色皿中加入100μL FC标准液和900μL TC工作液,混匀,37℃静置3h后于500nm测定A标准管。
    4. 测定管:依次在1mL玻璃比色皿中加入100μL FC待测液和900μL TC工作液,混匀,37℃静置3h后于500nm测定A测定管。
    5. 空白管:依次在1mL玻璃比色皿中加入100μL 试剂一900μL TC工作液,混匀,37℃静置3h后于500nm测定A测定管。

    注意:标准管和空白管只需测定一次。



    计算公式:
    1. 血清(浆)TC含量:
    TCμ mol /dL= C标准液×A测定管-A空白管)÷A标准管-A空白管)×100
    = 50×A测定管-A空白管)÷A标准管-A空白管)
    C标准液:0.5μmol/mL100 mL1dL=100 mL
    2. 组织TC含量:
    (1)按样本蛋白浓度计算
    TCμ mol/mg prot= C标准液×A测定管-A空白管)÷A标准管-A空白管)÷Cpr
       = 0.A测定管-A空白管)÷A标准管-A空白管)÷Cpr
    (2)按样本质量计算
    TCμ mol / g鲜重= C标准液×A测定管-A空白管)÷A标准管-A空白管)÷W
    = 0.A测定管-A空白管)÷A标准管-A空白管)÷W
    C标准液:0.5μmol/mL样本蛋白浓度mg/mLW样本质量,g/mL
    3. 细胞、细菌中TC含量:
    TCμ mol /104 cell= C标准液×A测定管-A空白管)÷A标准管-A空白管)÷细菌或细胞(104 cell /L
    = 0.A测定管-A空白管)÷A标准管-A空白管)÷细菌或细胞(104 cell /L
    C标准液:0.5μmol/mL

    注意事项:
    最低检出限为1nmol/mL
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