生物素定量检测试剂盒(显色法)

碧云天生产的生物素定量检测试剂盒(显色法)，即Biotin Quantitation Assay Kit (Colorimetric)，是基于生物素(Biotin)与链霉亲和素(Streptavidin)的亲和力强于HABA与Streptavidin的亲和力，通过生物素、生物素标记的抗体或蛋白等的强竞争使HABA与Streptavidin解离，导致HABA与Streptavidin结合时500nm处吸光度(A₅₀₀)的降低，从而定量检测抗体或蛋白等被生物素标记水平或样品中生物素浓度的试剂盒。

生物素定量检测试剂盒，也被称为生物素标记定量检测试剂盒(Biotin Labeling Quantitation Assay Kit)、生物素化水平检测试剂盒(Biotinylation Level Assay Kit)或生物素标记效率检测试剂盒(Biotin Labeling Efficiency Assay Kit)。

HABA，即4-Hydroxyazobenzene-2'-carboxylic Acid，中文名称为4'-羟基偶氮苯-2-羧酸，是一种小分子化合物，CAS号为1634-82-8，分子式为C₁₃H₁₀N₂O₃，分子量为242.23，是一种能与链霉亲和素发生弱相互作用的染料。游离的HABA在356nm处吸光度有最大吸收峰，当HABA与链霉亲和素(Streptavidin)或亲和素(Avidin)结合形成复合物后产生红移现象，其最大吸收峰红移至500nm处。与生物素和链霉亲和素的高亲和力(K_d=1×10^-15M)相比，HABA和链霉亲和素的亲和力较弱(K_d=5.8×10^-6M)，所以当溶液中存在生物素时，生物素会强竞争使HABA与链霉亲和素解离，导致HABA与Streptavidin结合时500nm处的吸光度降低。因此HABA常用于测定抗体或蛋白等被生物素化程度，吸光度与样品的生物素摩尔量成负相关(图1) [1-2]，即吸光度越低，抗体或蛋白的生物素化越高。

图1. 碧云天生物素定量检测试剂盒(显色法)(P0371)的工作原理图。

本试剂盒定量检测抗体或蛋白被生物素标记的水平是基于比尔-朗伯定律(Beer-Lambert law)，又称比尔定律或比耳定律(Beer's law)，即当一束平行单色光垂直通过某一均匀非散射的吸光物质时，其吸光度(Absorbance, A)与吸光物质的浓度(Concentration, C)及吸收层厚度(length, L)成正比，用公式表示为：A=ε×C×L [3]。当使用HABA进行生物素定量实验时，A是样品在500nm波长(λ)处的吸光度(无单位)；ε是500nm波长(λ)处的吸收系数或消光系数，HABA与Streptavidin复合物消光系数为34500M^-1cm^-1；C为用摩尔浓度表示的样品浓度(mol/l或mmol/ml)；L为路径长度，根据推荐的反应体积(200μl)及标准平底96孔板(FPT010/FPT011)进行实验时，L为固定数值0.5cm。

本试剂盒操作简单，检测速度快，完成检测仅需约5分钟，不仅适合少量样本的检测，也非常适合高通量筛选(High-throughput screening)的自动化操作系统。

碧云天提供“生物素定量计算表格”下载，只需输入A₅₀₀测定数值、生物素标记的抗体或蛋白的分子量、浓度和稀释倍数，即可自动得到生物素与抗体或蛋白的摩尔比，即每个抗体或蛋白被生物素标记的个数，计算方便、快速。

按照每孔200μl反应体系，本试剂盒检测生物素浓度的下限为2μM (400pmol)，通常每孔需要5-20μg生物素标记的抗体或蛋白。如果待检测样品总量有限或浓度较低(例如：生物素标记的多肽、DNA或RNA)，推荐使用荧光法的生物素定量检测试剂盒(P0373)，荧光法相比于显色法的灵敏度提高约50倍，按照每孔反应体系为100μl，检测生物素浓度的下限为40nM (4pmol)，通常每孔需要50ng-1μg生物素标记的抗体或蛋白或5-100pmol生物素标记的多肽、DNA或RNA。

按使用说明操作，本试剂盒小包装可以检测100个样品，中包装可以检测500个样品。

包装清单：

产品编号	产品名称	包装
P0371S-1	HABA/Streptavidin Premix	2ml
P0371S-2	Reaction Buffer	20ml
P0371S-3	Biotin Standard (500μM)	1ml
P0371S-4	Biotin-BSA (Positive Control)	200μl
—	说明书	1份

 

产品编号	产品名称	包装
P0371M-1	HABA/Streptavidin Premix	10ml
P0371M-2	Reaction Buffer	100ml
P0371M-3	Biotin Standard (500μM)	5ml
P0371M-4	Biotin-BSA (Positive Control)	500μl
—	说明书	1份

保存条件：

-20℃保存，一年有效。

注意事项：

Reaction Buffer在-20℃保存后融化如果有沉淀析出，可37℃水浴加热直至完全溶解。

所有试剂需完全解冻并平衡至室温后再使用，使用完毕后各试剂应立即按照试剂盒要求的条件保存。

Biotin-BSA (Positive Control)仅作为生物素标记的阳性对照，不提供具体的生物素标记数量。

本产品仅限于专业人员的科学研究用，不得用于临床诊断或治疗，不得用于食品或药品，不得存放于普通住宅内。

为了您的安全和健康，请穿实验服并戴一次性手套操作。