Recombinant Human LY6G6D

Recombinant Human LY6G6D

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  • ¥3300 - 18900
  • 抚生已认证
  • A-01K100091
  • 国产
  • 2025年07月15日
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    • 英文名

      Recombinant Human LY6G6D

    • 保质期

      说明书

    • 供应商

      上海抚生

    • 保存条件

      -20°C for 12 months as lyophilized; 2-8°C for 1 month under sterile conditions after reconstitution

    • 规格

      50μg/200μg/1mg

    规格:50μg产品价格:¥3300.0
    规格:200μg产品价格:¥6300.0
    规格:1mg产品价格:¥18900.0
    公司产品仅供研实验,不得用于临床诊断!
    商品详情:
    产品名称 Recombinant Human LY6G6D
    货号 A-01K100091
    规格 50μg, 200μg, 1mg
    种属 Human
    宿主 E.Coli
    表达区间 20-104
    分子量 9.2 kDa
    标签 N-terminal His Tag
    纯度 Greater than 95% as determined by SDS-PAGE
    应用 Western Blot, ELISA
    性状 Lyophilized from a 0.2 μm filtered solution in 10 mM Hepes, 500 mM NaCl with 5% trehalose, pH7.4
    溶解方法 Centrifuge the vial at 10,000 rpm for 1 minute, reconstitute at 200 μg/ml in sterile distilled water by gentle pipetting 2-3 times, don’t vortex
    存储 -20°C for 12 months as lyophilized; 2-8°C for 1 month under sterile conditions after reconstitution
    别名 LY66D_HUMAN, Ly6g6d, Lymphocyte antigen 6 complex locus protein G6d, Megakaryocyte-enhanced gene transcript 1 protein, Protein Ly6-D
    注意事项:
    1. 分装量的多少取决于每次试验的使用量。分装量不少于 10μl;分装量越少,由于蒸发和吸附于管内壁而引起的损失会越大。
    2. 避免使用无霜冰箱来保存重组蛋白。
    3. 解冻后的分装重组蛋白应保存于 4℃,一般可以保存1-2周。
    4. 稀释至工作浓度的重组蛋白最好不要在 4℃保存超过一天时间。
    5. 冷冻保存的蛋白溶液,在使用之前应室温解冻,确认充分溶解,没有结块后使用。
    6. 取用溶液时避免反复多次吹打蛋白溶液,以免引起不必要的活性损失。

     
    Recombinant Human LY6G6D Recombinant Human LY6G6D
     
    操作步骤:
    (一)获得目的基因
    1、通过PCR方法:以含目的基因的克隆质粒为模板,按基因序列设计一对引物(在上游和下游引物分别引入不同的酶切位点),PCR循环获得所需基因片段。
    2、通过RT-PCR方法:用TRIzol法从细胞或组织中提取总RNA,以mRNA为模板,逆转录形成cDNA第一链,以逆转录产物为模板进行PCR循环获得产物。
    3、人工合成法:依照检索到的目的基因序列,设计合成相互重叠的单链寡核苷酸,再通过重叠延伸PCR法拼接出全长,这种方法无需模板,是目前常用的获取基因的手段之一。
    (二)构建重组表达载体
    1、载体酶切:将表达质粒用限制性内切酶(同引物的酶切位点)进行双酶切,酶切产物行琼脂糖电泳后,用胶回收Kit或冻融法回收载体大片段。
    2、PCR产物双酶切后回收,在T4DNA连接酶作用下连接入载体。
    (三)获得含重组表达质粒的表达菌种
    1、将连接产物转化大肠杆菌,根据重组载体的标志(抗Amp或蓝白斑)作筛选,挑取单斑,碱裂解法小量抽提质粒,双酶切初步鉴定。
    2、测序验证目的基因的插入方向及阅读框架均正确,进入下步操作。否则应筛选更多克隆,重复亚克隆或亚克隆至不同酶切位点。
    3、以此重组质粒DNA转化表达宿主菌的感受态细胞。
    (四)诱导表达
    1、挑取含重组质粒的菌体单斑至2ml LB(含Amp50μg/ml)中37℃过夜培养。
    2、按1∶50比例稀释过夜菌,一般将1ml菌加入到含50mlLB培养基的300ml培养瓶中,37℃震荡培养至OD600 ≌0.4-1.0(最好0.6,大约需3hr)。
    3、取部分液体作为未诱导的对照组,余下的加入IPTG诱导剂至终浓度0.4mM作为实验组,两组继续37℃震荡培养3hr。
    4、分别取菌体1ml,离心12000g×30s收获沉淀,用100μl 1%SDS重悬,混匀,70℃10min。
    5、离心12000g×1min,取上清作为样品,可做SDS-PAGE等分析。
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