Stemcell 07851 Lymphoprep™淋巴细胞

Stemcell 07851 Lymphoprep™淋巴细胞分离液500ml

STEMCELL成立于1993年，为全球从事干细胞、免疫学、癌症、再生医学和细胞治疗研究的科学家提供高质量的细胞培养基、细胞分离技术、仪器以及配套产品。

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Stemcell 07851 Lymphoprep™淋巴细胞分离液500ml，产品简介：
产品品牌：Stemcell
产品货号：07851
产品名称：Lymphoprep™淋巴细胞分离液
产品规格：500ml

产品说明：
Lymphoprep是一种无菌、内毒素含量低的即用型分离液，是目前国内外分离正常人或外周血单个核细胞的常用方法，具有与昂贵的GE公司的PLUS或PREMIUM分离液同样的指标。

应用推荐:
从外周血、脐带血中分离单个核细胞

工作原理：
PBMC与血液中的其他成分存在密度差异，利用密度在1.077±0.001g/ml之间而且近于等渗的LymphoprepTM溶液作密度梯度离心时，红细胞和粒细胞由于密度大，故沉于分离液底部。PBMC密度稍低于分离液，故位于分离液界面上，获得PBMC。LymphoprepTM分离液含有多糖（polysacccharide）,多糖能粘附在细胞表面，使红细胞和粒细胞聚集下沉，但它对淋巴细胞的活性和红细胞和粒细胞进一步分离有负面影响。

注意事项:
该分离液仅适用于人体的外周血液，不适用于动物
使用该分离液时，需将待分离的血液用生理盐水做等体积的稀释
分离液的保存应置于无菌环境，并避光保存
详细操作步骤见产品说明书

技术参数
成分: 泛影葡胺钠(Sodium diatrizoate): 9.1% (w/v); 多糖: 5.7% (w/v)
密度: 1.077±0.001g/ml
渗透性: 290±15mOsm
内毒素含量: <1.0EU/ml
分离所得PBMC中红细胞的含量: 整个细胞数目的3-10%。

操作步骤(仅供参考)
第一步、
在含有抗凝剂(EDTA、heparin、或ACD) 的管子内收集血液，或者用去纤维蛋白的血液。此处抗凝剂的选择取决于得到淋巴细胞以后，后续实验的要求，一般选取EDTA即可。

第二步、
用等体积的0.9%的NaCI溶液 (即生理盐水)稀释血液。

第三步、
在12-15ml的离心管内，将6ml稀释后的血液铺在3ml分离介质Lymphoprep上。
此处铺层可以采用从上面铺，或从下面铺两种方法。铺层的关键是不能让血液和分离液混在一起，要界面分层清晰。

第四步、
在室温下——20摄氏度左右，用水平转子，800g的离心力，离心20分钟。(如果血液存放时间超过2小时——从人体抽出算起，离心时间延长为30分钟)。

第五步、
离心前和离心后，离心管内液体分层如下图所示。

离心后，离心管内位于血液和分离液界面处的明显的一层即为淋巴细胞层。
用移液管直接吸取淋巴细胞层，注意，不要去除上面的血液层，而是直接吸取。移至另一离心管中，

第六步、
用大约2倍体积的0.9%的NaCl溶液(生理盐水) 稀释收集到的淋巴细胞，在250g-300g的离心力下，离心10分钟，(此处在加上稀释液后的体积在15ml离心管内不宜超过5-6ml，体积过大，会降低淋巴细胞的产率)，收集沉淀，即得到所需的人外周血单个核细胞，即可用于后续的实验。