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- xybio
- XY-sh0173
- 上海
- 2026年01月06日
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- 详细信息
- 文献和实验
- 技术资料
- 库存：
80
- 英文名：
/
- 保质期：
3个月
- 供应商：
上海烜雅生物科技有限公司
- 保存条件：
详见说明书
- 规格：
100管/48样
二氢黄酮醇还原酶（Dihydro flavonol reductase，DFR）试剂盒
微量法 100 管/48 样
注意：正式测定之前选择 2-3 个预期差异大的样本做预测定。测定意义
二氢黄酮醇还原酶是类黄酮合成途径中的一个关键酶，在决定植物的花色、叶色、果色和其他经济器官的色泽及其营养品质方面起着重要作用。测定原理
二氢黄酮醇还原酶作用于二氢槲皮素产生儿茶素，可与香草醛缩合形成红色化合物，在500nm 处有特征吸收峰。
需自备的仪器和用品
研钵、低温离心机、震荡仪、氮吹仪、可见分光光度计/酶标仪、微量石英比色皿/96 孔板、水浴锅、无水乙醇、乙酸乙酯、浓盐酸。试剂组成和配制
提取液：液体 100mL×1 瓶，4℃保存。试剂一：液体 12mL×1 瓶，4℃保存。试剂二：液体 1.5mL×1 瓶，4℃保存。试剂三：粉剂×1 瓶，4℃保存，临用前加 2mL 蒸馏水溶解；用不完的试剂分装后-20℃保存， 禁止反复冻融。
试剂四：粉剂×1 瓶，4℃避光保存，临用前加入 30mL 浓盐酸溶解待用；用不完的试剂 4℃ 避光保存。
酶液提取
组织：按照组织质量（g）：提取液体积(mL)为 1：5~10 的比例（建议称取约 0.1g 组织，加入 1mL 提取液），进行冰浴匀浆。10000g ，4℃离心 10min，取上清，置冰上待测。测定操作表
1、 分光光度计/酶标仪预热 30min，调节波长至 500nm。2、 操作表
| 对照管 | 测定管 | |
| 酶液（μL） | 40 | 40 |
| 试剂一（μL） | 140 | 120 |
| 试剂二（μL） | 20 | |
| 试剂三（μL） | 20 | 20 |
| 混匀，30℃反应 30min | ||
| 乙酸乙酯（μL） | 200 | 200 |
| 37℃震荡 10min，取上层溶液，N2 吹干 | ||
| 无水乙醇（μL） | 100 | 100 |
| 充分震荡 | ||
| 试剂四(μL) | 300 | 300 |
| 混匀，25℃静置 10min，于微量石英比色皿/96 孔板中测定 500nm 处吸光 值 A。分别记为A 对照管和A 测定管，△A=A 测定管-A 对照管 |
||
酶活性计算公式
- 用微量石英比色皿测定的计算公式如下
- 按照蛋白浓度计算
DFR 活性（mmol/min/mg prot）=（△A-0.0002）÷0.0184×V 反总÷（V 样×Cpr ）÷T ÷2
= 9.06×（△A-0.0002）÷Cpr
- 按照样本质量计算
DFR 活性（mmol/min/g 鲜重）= （△A-0.0002）÷0.0184×V 反总÷（V 样×W÷V 样总）÷T ÷2
= 9.06×（△A-0.0002）÷W
V 反总：反应总体积，1mL；V 样：反应体系中样本体积，0.1mL；V 样总：加入提取液体积，1mL；Cpr：样本蛋白浓度，mg/mL；W，样本质量，g；T：反应时间，30min
- 用 96 孔板测定的计算公式如下
- 按照蛋白浓度计算
DFR 活性（mmol/min/mg prot）=（△A-0.0002）÷0.0092×V 反总÷（V 样×Cpr ）÷T÷ 2
= 9.06×（△A-0.0002）÷Cpr
- 按照样本质量计算
DFR 活性（mmol/min/g 鲜重）= （△A-0.0002）÷0.0092×V 反总÷（V 样×W÷V 样总）÷T ÷2
= 9.06×（△A-0.0002）÷W
V 反总：反应总体积，1mL；V 样：反应体系中样本体积，0.1mL；V 样总：加入提取液体积，1mL；Cpr：样本蛋白浓度，mg/mL；W，样本质量，g；T：反应时间，30min
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文献和实验芥菜型油菜种皮转录组De Novo拼接及类黄酮生物合成基因的鉴定
，大约71.5%（49,758个独立基因）能比对到Nr蛋白数据库。RPKM分析结果显示，棕籽种皮较黄籽种皮，有802个基因上调，502个基因下调。生物学通路分析显示，46个基因与类黄酮合成相关。在黄籽中，与后期类黄酮生物合成相关的编码基因二氢黄酮还原酶(DFR)、白花色素双加氧酶(LDOX)、花色素还原酶(ANR)不表达或者表达水平非常低，这也暗示了这些与PA合成相关的基因可能与芥菜型油菜种皮的着色相关，qRT-PCR检测进一步确认了该结果。 本研究是湖南农业大学油料作物研究所刘忠松教授
它们之间的相互作用位点有利于基因治疗药物的开发。 二、利用酵母双杂交在细胞体内研究抗原和抗体的相互作用 利用酶联免疫（ELISA）、免疫共沉淀（CO-IP）技术都是利用抗原和抗体间的免疫反应，可以研究抗原和抗体之间的相互作用，但是，它们都是基于体外非细胞的环境中研究蛋白质与蛋白质的相互作用。而在细胞体内的抗原和抗体的聚积反应则可以通过酵母双杂交进行检测。例如：来源于矮牵牛的黄烷酮醇还原酶DFR与其抗体scFv的反应中，抗体的单链的三个可变区A4、G4、H3与抗原之间作用有强弱
作用位点有利于基因治疗药物的开发。 2、利用酵母双杂交在细胞体内研究抗原和抗体的相互作用 利用酶联免疫（ELISA）、免疫共沉淀（CO-IP）技术都是利用抗原和抗体间的免疫反应，可以研究抗原和抗体之间的相互作用，但是，它们都是基于体外非细胞的环境中研究蛋白质与蛋白质的相互作用。而在细胞体内的抗原和抗体的聚积反应则可以通过酵母双杂交进行检测。例如：来源于矮牵牛的黄烷酮醇还原酶DFR与其抗体scFv的反应中，抗体的单链的三个可变区A4、G4、H3与抗原之间作用有强弱的差异。Geert等利用酵母
