总抗氧化能力（ABTS法）测试盒（可见分光光度法）

总抗氧化能力 (ABTS 法)试剂盒说明书

可见分光光度50管/48样


注 意：正式测定之前选择 2-3 个预期差异大的样本做预测定。


研究意义：

测定对象中各种抗氧化物质和抗氧化酶等构成总抗氧化水平。在生物学、医学和药学研究中常常检测血浆、血清、唾液、尿液等各种体液，细胞或组织等裂解液、植物或中草药抽提液及各种抗氧化物(antioxidant)溶液的总抗氧化能力。


测定原理：

ABTS 法是使用最广泛的间接检测方法，可用于亲水性和亲脂性物质抗氧化能力测定。ABTS经氧化后生成稳定的蓝绿色阳离子自由基 ABTS⁺，能溶于水相或酸性乙醇介质中，在 734nm 处有最大吸收。被测物质加入 ABTS⁺溶液后，所含抗氧化成分能与 ABTS⁺发生反应而使反应体系褪色。在 734nm 检测吸光度的变化，并以 Trolox 作为对照体系量化抗氧化物质的抗氧化能力。


自备实验用品：

恒温水浴锅、低温离心机、酶标仪、96 孔板和蒸馏水。


试剂组成和配制：

提取液：液体 120mL×1 瓶，4℃保存。

试剂一：液体 24mL×1 瓶，4℃避光保存。

试剂二：粉剂×2 瓶，4℃避光保存。


样品的制备：
 

1. 血清、血浆、唾液或尿液等液体样品

血浆（制备时可以使用肝素或柠檬酸钠抗凝，不宜使用 EDTA  抗凝）4℃，5000rpm 离心

10min，取上清待测。血清、唾液或尿液样品直接用于测定，也可以-80℃冻存（不宜超过
 

1. d）后再测定。

(2) 组织样品

按照组织质量（g）：提取液体积(mL)为 1：5~10 的比例（建议称取约 0.1g 组织，加入 1mL 提取液）进行冰浴匀浆，然后 10000g，4℃离心 10min，取上清，置冰上待测。

(3) 细胞样品

按照细胞数量（10⁴ 个）：提取液体积（mL）为 500~1000：1 的比例（建议 500 万细胞加入 1mL 提取液），冰浴超声波破碎（功率 200W，超声 3s，间隔 10s，重复 30 次）；10000g，4℃离心 10min，取上清，置冰上待测。


操作步骤：

1、 酶标仪预热 30min，调节波长至 734nm。

2、 工作液的配置：临用前取试剂二一瓶，加入 11mL 试剂一，震荡混匀 20min 后，静置，

取上清使用。（注意，现配现用）
 

1. 操作表（在 EP 管中反应）

	空白管	测定管
提取液（μL）	10
样品（μL）		10
工作液（μL）	190	190

充分混匀，10min 内测定 734nm 吸光值，△A= A 空白-A 测定


注意：空白管只需测定一次，吸取工作液时不要吸到底部沉淀，若 A 测定小于 0.4，需用提取