本试剂盒仅供科研使用
酪氨酸解氨酶(Tyrosine ammonia-lyase,TAL)试剂盒说明书
(货号:WS7310W 微板法 96 样)
一、产品简介:
酪氨酸解氨酶(TAL,EC 4.3.1.23)是对香豆酸合成的另一种途径中的关键酶。在生
物体内,对香豆酸的合成有两条途径。一是以苯丙氨酸为底物,经苯丙氨酸解氨酶催化生
成肉桂酸, 再经细胞色素 P450 酶系催化生成对香豆酸。而部分苯丙氨酸解氨酶被发现
可以直接催化酪氨酸,生成对香豆酸,成为对香豆酸合成的另一途经,
本试剂盒根据酪氨酸解氨酶(TAL)催化 L-酪氨酸生成对香豆酸,该物质在 310nm 处
有最大吸收值,通过测定吸光值升高速率计算 TAL 活性。
二、试剂盒组分与配制:
试剂名称
规格
保存要求
提取液
液体 100mL×1 瓶
4℃保存
试剂一
液体 35mL×1 瓶
4℃保存
试剂二
液体 5mL×1 瓶
4℃保存
三、所需的仪器和用品:
酶标仪、96 孔板(UV 板)、水浴锅、离心机、可调式移液器、研钵、冰和蒸馏水。
【注】:普通酶标板只能透过可见光,不能透过紫外光,检测波长小于 340nm 必须使用 UV 板
四、酪氨酸解氨酶(TAL)的测定:
建议正式实验前选取 2 个样本做预测定,了解本批样品情况,熟悉实验流程,避免实验
样本和试剂浪费!
1、样本制备
① 组织样本:
取约 0.1g 组织,加入 1mL 提取液,进行冰浴匀浆。12000rpm ,4℃离心 10min,取上清,
置冰上待测。
【注】:若增加样本量,可按照组织质量(
g):提取液体积(mL)为 1:5~10 的比例进行提取
② 细菌/细胞样本:
先收集细菌或细胞到离心管内,离心后弃上清;取约 500 万细菌或细胞加入 1mL
提取液,超声波破碎细菌或细胞(冰浴,功率 200W,超声 3s,间隔 10s,重复 30 次);
12000rpm 4℃离心 10min,取上清,置冰上待测。
【注】:若增加样本量,可按照细菌/细胞数量(104):提取液(mL)为 500~1000:1 的比例进行提取。
2、上机检测
① 酶标仪预热 30min 以上,调节波长至 310nm。
② 在 96 孔 UV 板中按顺序加入下列试剂:
【注】若△A 在零附近徘徊,可增加样本加样量 V1(如增至 30μL,则试剂一相应减少)或延长反
应时间 T(如增至 90min),则改变后的加样量 V1 或反应时间 T 需代入计算公式重新计算。
试剂名称(μL)
测定管
对照管
样本
20
20
试剂一
130
180
试剂二
50
混匀,37℃反应 60 min,立即于 310nm 处读取吸光值 A,
△A=A 测定-A 对照(每个样本需做一个对照管)。本试剂盒仅供科研使用
五、结果计算:
1、按样本鲜重计算
酶活定义:在 37℃下,每克组织在反应体系中每小时使 A310 吸光值变化 0.05 为一个酶活
单位(U)。
TAL(△OD310/h/g 鲜重)=ΔA÷(W× V1÷V)÷0.05÷T =1000×ΔA÷W
2、按蛋白浓度计算
酶活定义:在 37℃下,每毫克组织蛋白在反应体系中每小时使 A310 吸光值变化 0.05 为一
个酶活单位(U)。
TAL(△OD310/h/mg prot)=ΔA÷(V1×Cpr)÷0.05÷T =1000×ΔA÷Cpr
3、按细胞/细菌数量计算:
酶活定义:在 37℃下,每 104 个细胞/细菌在反应体系中每小时使 A310 吸光值变化 0.05
为一个酶活单位(U)。
TAL(△OD310/h/104 cell)= ΔA÷(500×V1÷V) ÷0.05÷T=2×ΔA
V---加入提取液体积,1 mL;
V1---加入样本体积,0.02mL;
T---反应时间,60 min=1h;
W---样本质量,g;
Cpr---样本蛋白质浓度,mg/mL;建议使用本公司的 BCA 蛋白含量检测试剂盒。
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