- ￥580
- wksubio
- WS0310F
- 国内
- 2025年11月19日
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- 详细信息
- 技术资料
- 库存：
大量
- 英文名：
Protein carbonyl content determination kit
- CAS号：
WS0310F
- 保质期：
3个月
- 供应商：
上海瓦兰生物
- 保存条件：
4℃
- 规格：
48T
本试剂盒仅供科研使用
蛋白质羰基含量测定试剂盒
（货号：WS0310F 分光法 48 样 ）
一、产品简介：
蛋白质不仅是生物体的重要组成成分，而且在生命活动中担负重要的功能，对蛋白质
氨基酸侧链的氧化可导致羰基产物的积累。因此蛋白质的羰基化被广泛地用于评价各种生
物有机体的氧化程度，该指标的检测极具实际意义。
被氧化后的蛋白质羰基可与 2,4-二硝基*肼（DNPH）反应生成红棕色沉淀的 2,4-二
硝*苯腙，接着用盐酸胍溶解沉淀后于 370nm 下的检测，即可得到蛋白质的羰基含量。
二、试剂盒组分与配制：
试剂名称
规格
保存要求
备注
提取液
液体 50mL×1 瓶
4℃保存
试剂一
液体 1mL×1 支
4℃保存
试剂二
粉剂 mg×1 瓶
4℃保存
临用前甩几下，使试剂落入底部，加 3mL 的
浓盐酸完全溶解后（可超声溶解），再缓缓加
15mL 蒸馏水，溶解混匀备用。
试剂三
液体 20mL×1 瓶
4℃保存
试剂四
自备
4℃保存
无水乙醇：乙酸乙酯=1:1 比例配制(如 40mL
的无水乙醇和 40mL 乙酸乙酯混匀备用)
试剂五
液体 40mL×1 瓶
4℃保存
三、所需的仪器和用品：
紫外分光光度计、1mL 石英比色皿（光径 1cm）、恒温水浴锅、低温离心机、漩涡震荡
仪、盐酸、无水乙醇、乙酸乙酯。
四、蛋白羰基含量的测定：
建议正式实验前选取 2 个样本做预测定，了解本批样品情况，熟悉实验流程，避免实验样
本和试剂浪费！
1、样本制备
① 组织样本：
称取约 0.1g 组织，加入 1mL 提取液，进行冰浴匀浆，8000rpm 室温离心 10min，上清
备用；上清液与试剂一按照 9:1 比例混合（如 0.45mL 上清液加 0.05mL 试剂一），室温放
置 10min 后，12000rpm 室温离心 10min，取上清待测。
【注】：也可以按照组织质量（
g）：提取液体积(mL)为 1：5~10 的比例提取
② 细菌/细胞样本：
先收集细菌或细胞到离心管内，离心后弃上清；取 500 万细菌或细胞加入 1mL 提取液；
冰浴超声波破碎细菌或细胞（冰浴，功率 300w，超声 3 秒，间隔 7 秒，总时间 3min）；
8000rpm 室温离心 10min，上清备用；上清液与试剂一按照 9:1 比例混合（如 0.45mL 上
清液加 0.05mL 试剂一），室温放置 10min 后，12000rpm 室温离心 10min，取上清待测。
【注】：也可按照细菌或细胞数量（104 个）：提取液体积（mL）为 500~1000：1 的比例进行提取
③ 液体样本：直接检测。
2、上机检测
① 紫外分光光度计预热 30min，调节波长至 370nm，用试剂四调零。本试剂盒仅供科研使用
2
② 在 EP 管中依次加入：
试剂名称（
μL）
测定管
空白管（仅做一次）
样本
160
蒸馏水
160
试剂二
320
320
混匀，37℃避光反应 30min
试剂三
400
400
混匀，4℃，12000rpm 离心 10min，弃上清，留沉淀
试剂四（自备）
800
800
漩涡混匀，4℃，12000rpm 离心 10min，弃上清，留沉淀
此步骤（加试剂四这步）需做 2 次
试剂五
800
800
漩涡混匀，37℃温育 15min，沉淀全部溶解后，
4℃，12000rpm
离心 10min，取全部澄清上清液于 1mL 石英比色皿（光径
1cm）中于 370nm 处测定，ΔA=A 测定管-A 空白管。
【注】若沉淀不能完全溶解，可增加试剂五的体积即 V2；或 A 测定的值大于 1.5 可用
试剂五稀释检测液；则改变后的 V2 或稀释倍数 D 需代入计算公式重新计算。
五、结果计算：
1、按照样本重量计算
蛋白质羰基含量(μmol/g 鲜重)=[ΔA÷(ε×d)×V2×106]÷(W×V1÷V×9÷10) ×D
=0.253×ΔA÷W×D
2、按照细菌或细胞样本
蛋白质羰基含量(μmol/104cell)=[ΔA÷(ε×d)×V2×106]÷(细胞数量×V1÷V×9÷10)
=0.253×ΔA÷细胞数量
3、按照液体体积
蛋白质羰基含量(μmol/mL)=[ΔA÷(ε×d)×V2×106]÷V1=0.227×ΔA
ε---羰基摩尔消光系数，22×103L/mol/cm；
d---光径，1cm；
V---加入提取液体积，1 mL；
V1---加入样本体积，0.16mL；
V2---反应体系总体积，0.8mL=8×10-4L；
W---样本质量，g。
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