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蛋白质羰基(PCO)试剂盒

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  • ￥580
  • wksubio
  • WS0310F
  • 国内
  • 2025年11月19日
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    • 英文名：

      Protein carbonyl content determination kit

    • CAS号：

      WS0310F

    • 保质期：

      3个月

    • 供应商：

      上海瓦兰生物

    • 保存条件：

      4℃

    • 规格：

      48T

    本试剂盒仅供科研使用
    蛋白质羰基含量测定试剂盒
    （货号：WS0310F 分光法 48 样 ）
    一、产品简介：
    蛋白质不仅是生物体的重要组成成分，而且在生命活动中担负重要的功能，对蛋白质
    氨基酸侧链的氧化可导致羰基产物的积累。因此蛋白质的羰基化被广泛地用于评价各种生
    物有机体的氧化程度，该指标的检测极具实际意义。
    被氧化后的蛋白质羰基可与 2,4-二硝基*肼（DNPH）反应生成红棕色沉淀的 2,4-二
    硝*苯腙，接着用盐酸胍溶解沉淀后于 370nm 下的检测，即可得到蛋白质的羰基含量。
    二、试剂盒组分与配制：
    试剂名称
    规格
    保存要求
    备注
    提取液
    液体 50mL×1 瓶
    4℃保存
    试剂一
    液体 1mL×1 支
    4℃保存
    试剂二
    粉剂 mg×1 瓶
    4℃保存
    临用前甩几下，使试剂落入底部，加 3mL 的
    浓盐酸完全溶解后（可超声溶解），再缓缓加
    15mL 蒸馏水，溶解混匀备用。
    试剂三
    液体 20mL×1 瓶
    4℃保存
    试剂四
    自备
    4℃保存
    无水乙醇：乙酸乙酯=1:1 比例配制(如 40mL
    的无水乙醇和 40mL 乙酸乙酯混匀备用)
    试剂五
    液体 40mL×1 瓶
    4℃保存
    三、所需的仪器和用品：
    紫外分光光度计、1mL 石英比色皿（光径 1cm）、恒温水浴锅、低温离心机、漩涡震荡
    仪、盐酸、无水乙醇、乙酸乙酯。
    四、蛋白羰基含量的测定：
    建议正式实验前选取 2 个样本做预测定，了解本批样品情况，熟悉实验流程，避免实验样
    本和试剂浪费！
    1、样本制备
    ① 组织样本：
    称取约 0.1g 组织，加入 1mL 提取液，进行冰浴匀浆，8000rpm 室温离心 10min，上清
    备用；上清液与试剂一按照 9:1 比例混合（如 0.45mL 上清液加 0.05mL 试剂一），室温放
    置 10min 后，12000rpm 室温离心 10min，取上清待测。
    【注】：也可以按照组织质量（
    g）：提取液体积(mL)为 1：5~10 的比例提取
    ② 细菌/细胞样本：
    先收集细菌或细胞到离心管内，离心后弃上清；取 500 万细菌或细胞加入 1mL 提取液；
    冰浴超声波破碎细菌或细胞（冰浴，功率 300w，超声 3 秒，间隔 7 秒，总时间 3min）；
    8000rpm 室温离心 10min，上清备用；上清液与试剂一按照 9:1 比例混合（如 0.45mL 上
    清液加 0.05mL 试剂一），室温放置 10min 后，12000rpm 室温离心 10min，取上清待测。
    【注】：也可按照细菌或细胞数量（104 个）：提取液体积（mL）为 500~1000：1 的比例进行提取
    ③ 液体样本：直接检测。
    2、上机检测
    ① 紫外分光光度计预热 30min，调节波长至 370nm，用试剂四调零。本试剂盒仅供科研使用
    2
    ② 在 EP 管中依次加入：
    试剂名称（
    μL）
    测定管
    空白管（仅做一次）
    样本
    160
    蒸馏水
    160
    试剂二
    320
    320
    混匀，37℃避光反应 30min
    试剂三
    400
    400
    混匀，4℃，12000rpm 离心 10min，弃上清，留沉淀
    试剂四（自备）
    800
    800
    漩涡混匀，4℃，12000rpm 离心 10min，弃上清，留沉淀
    此步骤（加试剂四这步）需做 2 次
    试剂五
    800
    800
    漩涡混匀，37℃温育 15min，沉淀全部溶解后，
    4℃，12000rpm
    离心 10min，取全部澄清上清液于 1mL 石英比色皿（光径
    1cm）中于 370nm 处测定，ΔA=A 测定管-A 空白管。
    【注】若沉淀不能完全溶解，可增加试剂五的体积即 V2；或 A 测定的值大于 1.5 可用
    试剂五稀释检测液；则改变后的 V2 或稀释倍数 D 需代入计算公式重新计算。
    五、结果计算：
    1、按照样本重量计算
    蛋白质羰基含量(μmol/g 鲜重)=[ΔA÷(ε×d)×V2×106]÷(W×V1÷V×9÷10) ×D
    =0.253×ΔA÷W×D
    2、按照细菌或细胞样本
    蛋白质羰基含量(μmol/104cell)=[ΔA÷(ε×d)×V2×106]÷(细胞数量×V1÷V×9÷10)
    =0.253×ΔA÷细胞数量
    3、按照液体体积
    蛋白质羰基含量(μmol/mL)=[ΔA÷(ε×d)×V2×106]÷V1=0.227×ΔA
    ε---羰基摩尔消光系数，22×103L/mol/cm；
    d---光径，1cm；
    V---加入提取液体积，1 mL；
    V1---加入样本体积，0.16mL；
    V2---反应体系总体积，0.8mL=8×10-4L；
    W---样本质量，g。

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