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Recombinant Hum
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20
Recombinant Human Insulin
说明书
上海抚生
-20°C for 12 months as lyophilized; 2-8°C for 1 month under sterile conditions after reconstitution
50μg/200ug/1mg
公司产品仅供研实验,不得用于临床诊断!
商品详情:
注意事项:1. 分装量的多少取决于每次试验的使用量。分装量不少于 10μl;分装量越少,由于蒸发和吸附于管内壁而引起的损失会越大。2. 避免使用无霜冰箱来保存重组蛋白。3. 解冻后的分装重组蛋白应保存于 4℃,一般可以保存1-2周。4. 稀释至工作浓度的重组蛋白最好不要在 4℃保存超过一天时间。5. 冷冻保存的蛋白溶液,在使用之前应室温解冻,确认充分溶解,没有结块后使用。6. 取用溶液时避免反复多次吹打蛋白溶液,以免引起不必要的活性损失。操作步骤:(一)获得目的基因1、通过PCR方法:以含目的基因的克隆质粒为模板,按基因序列设计一对引物(在上游和下游引物分别引入不同的酶切位点),PCR循环获得所需基因片段。2、通过RT-PCR方法:用TRIzol法从细胞或组织中提取总RNA,以mRNA为模板,逆转录形成cDNA第一链,以逆转录产物为模板进行PCR循环获得产物。3、人工合成法:依照检索到的目的基因序列,设计合成相互重叠的单链寡核苷酸,再通过重叠延伸PCR法拼接出全长,这种方法无需模板,是目前常用的获取基因的手段之一。(二)构建重组表达载体1、载体酶切:将表达质粒用限制性内切酶(同引物的酶切位点)进行双酶切,酶切产物行琼脂糖电泳后,用胶回收Kit或冻融法回收载体大片段。2、PCR产物双酶切后回收,在T4DNA连接酶作用下连接入载体。(三)获得含重组表达质粒的表达菌种1、将连接产物转化大肠杆菌,根据重组载体的标志(抗Amp或蓝白斑)作筛选,挑取单斑,碱裂解法小量抽提质粒,双酶切初步鉴定。2、测序验证目的基因的插入方向及阅读框架均正确,进入下步操作。否则应筛选更多克隆,重复亚克隆或亚克隆至不同酶切位点。3、以此重组质粒DNA转化表达宿主菌的感受态细胞。(四)诱导表达1、挑取含重组质粒的菌体单斑至2ml LB(含Amp50μg/ml)中37℃过夜培养。2、按1∶50比例稀释过夜菌,一般将1ml菌加入到含50mlLB培养基的300ml培养瓶中,37℃震荡培养至OD600 ≌0.4-1.0(最好0.6,大约需3hr)。3、取部分液体作为未诱导的对照组,余下的加入IPTG诱导剂至终浓度0.4mM作为实验组,两组继续37℃震荡培养3hr。4、分别取菌体1ml,离心12000g×30s收获沉淀,用100μl 1%SDS重悬,混匀,70℃10min。5、离心12000g×1min,取上清作为样品,可做SDS-PAGE等分析。公司正在热销的产品:HotStart Taq DNA Polymerase(5U/ul) (热启动酶) 500U2×HotStart Taq PCR MasterMix(含染料)(2×Taq Mix热启动预混液) 1ml2×HotStart Taq PCR MasterMix(含染料) 1ml×5Taq Plus DNA Polymerse(5U/ul) 高产量聚合酶 500U2×Taq Plus PCR MasterMix( 含绿染料) 2×Taq Mix高产量预混液 1ml2×Taq Plus PCR MasterMix( 含绿染料) 1ml×52×Taq Plus PCR MasterMix( 含绿染料) 1ml×502×Taq Plus PCR MasterMix( 含绿染料) 1ml×1002×Taq Plus PCR MasterMix( 不含染料) 1ml2×Taq Plus PCR MasterMix( 不含染料) 1ml×52×Taq Plus PCR MasterMix( 不含染料) 1ml×502×Taq Plus PCR MasterMix( 不含染料) 1ml×100Long Taq DNA Polymerse(5U/ul) 长片段扩增聚合酶 500U2×Long Taq PCR MasterMix( 含绿染料)(2×Taq Mix长片段扩增预混液) 1ml2×Long Taq PCR MasterMix( 含绿染料)(3×Taq Mix长片段扩增预混液) 1ml×5Pfu DNA Polymerase(2.5U/ul) 高保真聚合酶 250UPfu DNA Polymerase(2.6U/ul) 高保真聚合酶 250U×102×Pfu PCR MasterMix(含染料)2×Taq Mix高保真预混液 1ml2×Pfu PCR MasterMix(含染料)3×Taq Mix高保真预混液 1ml×522RV1人前列腺癌细胞 22RV1293FT人胚肾细胞 293FT293T人胚肾细胞 293T5-8F人高转移鼻咽癌细胞系 5-8F769-P人肾细胞腺癌细胞 769-P786-O[786-0]人肾透明细胞腺癌细胞 786-O[786-0]95-D人高转移肺癌细胞 95-DA172人胶质母细胞瘤细胞 A172A-204人横纹肌肉瘤细胞 A-204A2058人黑色素瘤细胞 A2058A2780人卵巢癌细胞 A2780A2780+GFP人卵巢癌细胞+GFP A2780+GFPA3人T淋巴细胞白血病细胞 A3A375人恶性黑色素瘤细胞 A375A375+EGFP人恶性黑色素瘤细胞+EGFP A375+EGFPRecombinant Human InsulinA431(A-431)人表皮癌细胞 A431(A-431)A498人肾癌细胞 A498A549 人肺癌细胞 A549A549+RFP 人肺癌细胞+RFP A549+RFPA549+luc 人肺癌细胞荧光素酶标记 A549+luc
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