本试剂盒仅供科研使用
抗脂质过氧化能力(LPO 抑制率)试剂盒说明书
( 货号:WS9410F 分光法 48 样)
一、产品简介:
过氧化脂质具有破坏生物膜的作用,导致细胞破坏、机体损伤。以硫代巴*妥酸(TBA)法测定外源
添加的脂质过氧化体系的产物丙二醛,最终形成在 535nm 处有特征吸收峰的有色产物。当加入抗脂质过
氧化物质(LPO)时,它能抑制外源脂质过氧化体系中产物丙二醛的产生,从而使溶液在 535nm 处光吸
收减弱。故可以通过测定 A535 值来评价抗脂质过氧化物质的能力即抑制脂质过氧化(LPO)能力。
二、试剂盒组分与配制:
试剂名称
规格
保存要
求
备注
试剂一
液体 15mL×1 瓶
4℃保存
试剂二
粉剂 mg×3 支
4℃保存
临用前甩几下,使粉剂落到底部,每支再
加 3mL 试剂一,超声 20min(周围以冷水
冷却),最后是乳白色液体,三天内用完。
试剂三
液体 1mL×1 支
4℃保存 用前用蒸馏水稀释 10 倍后再使用。
试剂四
液体 18mL×1 支
4℃保存 若有沉淀析出,可超声溶解。
三、所需的仪器和用品:
可见分光光度计、1mL 玻璃比色皿(光径 1cm)、可调式移液器、天平、离心机。
四、抗脂质过氧化能力(LPO 抑制率)的测定:
1、样本制备:
① 组织样本:称取 0.1g 样本(若是干样可取 0.02-0.05g),加入 1mL 的 80%乙醇(自
备)进行匀浆,匀浆后转入 2mL 离心管中;于 50℃,200-300W 条件下超声提取 30min
(间隔 5min 振荡混匀一次)。若有损耗需用 80%乙醇定容至 1mL,12000rpm 室温
离心 10min,取上清待测。
② 液体:直接检测;若浑浊,离心后取上清检测。
2、上机检测:
① 可见分光光度计预热 30min 以上,调节波长至 535nm,蒸馏水调零。
② 不同样本清除能力不一,可先选取 2 个样本做检测,在 EP 管中依次加入下列试剂:
试剂名称(
μL)
测定管
空白管
样本
160
蒸馏水
160
试剂二
160
160
试剂三
160
160
混匀,避光于 37℃孵育 30min
试剂四
320
320
95℃孵育 15min,迅速冷却,5000r/min 离心 10min,取上清
700μL 至 1mL 玻璃比色皿(光径 1cm)中,于 535nm 测定。
【注】:若 A 测定值小于 0.15,可对样本用提取液即 80%乙醇稀释后再测定;或若 A 测定大于等于空白
管,需加大样本取样质量 W,则改变后的 D 和 W 需代入公式计算。
五、结果计算:抗脂质过氧化能力或 LPO 抑制率 %= (A 空白-A 测定)÷A 空白×100%