赛洛捷克SCILOGEX 新SCI1000-G老TC1000

用PCR、GC发夹及变性梯度

扩增基因组或者克隆的DNA 样品，两条寡核苷酸链与DNA 的两侧相结合。 其中一条链的5'末端附加40-45nt的GC富含序列;该5'末端结构在PCR 过程中掺入扩增 的DNA 片端的5'末端。扩增的DNA 片段在对待测DNA 浓度合适的变性剂梯度胶中电泳， 凝胶用EB染色、紫外检测。因突变或中性多态性而具有一个碱基差别的DNA 片段在凝 胶中迁移到不同的位置，经EB着色呈现不同的带。 　　在开始使用PCR /GC发夹方法前有几个方面需予以考虑。如下面将要讨论的，尽管 可用DGGE检测和1000

Ficoll密度梯度离心法

1.不同浓度(密度)Percoll溶液的制备: 先用9份Percoll与1份8.5％ NaCl或1.5MPBS混合达到生理性渗透压，然后用生理溶液(0.85％ NaCl或0.15M PBS)稀释到所需浓度。 　Percoll浓度(％)　　70　　　　60　　　　50　　　　40　　　　30　　　　　20 　　比重g／ml　　　1.090 1.077 1.067 1.056 1.043 1.031 2.　不连续密度梯度Percoll层的制备: 先将试管

不连续密度梯度分离法分离NK细胞

部分是40%与42.5%Percoll之间，第三部分是42.5%与45%的Percoll之间，这两部分富含NK细胞； ⑥用Hank’s液洗2次，1000r/min，10min，细胞重悬于Hank液中，4℃存放备用。 结果观察 通过形态学分析，Percoll密度梯度离心分离的NK细胞80%为大颗粒淋巴细胞，细胞活力95%。 鉴定 CD56、CD57单抗间接免疫荧光发鉴定纯度，台盼蓝拒染法测存活率。 注意事项 1. 血标本应新鲜，宜在4℃下分离细胞，以保持细胞活力。