为确保细胞系的特性保持不变,请将细胞保持在相同的培养基、血清和添加剂中,并采用与建立培养物相同的传代培养方案。培养条件的任何变化都有可能改变细胞系的特性。 使用新细胞系时要特别小心,因为不同供应商的培养基配方各不相同,即使是名称相似或相同的培养基也是如此。仔细阅读描述、配方和标签,以确保使用适当的培养基,否则细胞系可能会无意中适应新培养基。所有ATCC细胞系都带有有关其生长培养基的信息。在大多数情况下,推荐的培养基和血清可以与细胞系一起从 ATCC 购买。 使用以下程序使细胞系适应新培养基: 1. 以 1:2 的分流比将品系传代培养(将培养物分成两半)分成两个容器。 2. 用原始培养基维持一个细胞,并继续传代培养这些细胞以完成整个适应过程。在第二个容器中使用原始培养基和新培养基的 1:1 混合物。在原始培养基中生长的培养物可作为参考点,并在适应细胞无法在此过程中存活的情况下提供保障。低分流比有助于减轻与传代培养和新培养基相关的压力。 3. 监测两种培养基中的细胞生长,并观察形态或生长速率的任何变化。如果它们相同,则在下一次传代时以 1:2 的分流比在 1:3 培养基混合物中传代适应细胞(25% 原始细胞,75% 新细胞)。 4. 监测原始培养物和适应培养物的生长速度和形态。 5. 在下一段中,将适应文化按 1:2 的比例分成 1:7 的中等混合(12.5% 的原始,87.5% 的新)。 6. 监测原始培养物和适应培养物的生长速度和形态。如果细胞相同,则在下一次传代时,在100%新培养基中以1:2的比例分裂适应细胞。在这一点上,文化应该适应新的媒介。 To confirm complete adaptation to the new medium, perform functional tests on cells derived from the original and new medium. If at any point in the process the adapting culture fails to perform as well as the reference culture, then allow the adapting culture more time and a few more passages in their current medium mix (eg, 1:3, 1:7, etc.) until they match the reference cells. The same approach can be used to adapt cells to serum-free medium; simply decrease the serum level in the medium by half with each passage until a 0.06% (or lower) serum level is reached. At this point, the cells can be maintained in serum-free medium. If at any point the growth rate declines, then the serum level should be increased to the level where the cells grew normally. In this procedure, start with the “serum-free” medium supplemented with serum so that only the level of serum changes with each passage.