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ATCC H19-7/IGF-
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H19-7/IGF-IR
大量
北京百奥创新科技有限公司
hippocampus
是
1. 细胞传代中遇到的问题及解决方案:
(1)传代密度过高
一旦细胞养太久至融合度过高(>90%)才传代,容易使细胞产生老化现象,甚至是堆叠,再消化细胞时不易吹打成单颗细胞,即便再重新铺盘传代,细胞也无法回到原本的特性了。(如:单层细胞,没长满就发生堆叠现象)
解决方案:尽量避免融合度过高,镜下观察融合度约达到80%即可传代分盘。
(2)传代密度低
哺乳动物贴壁培养细胞,若细胞培养到80-90%密度需要开始传代,在传代接种细胞密度过低,细胞间距离太远,就无法在细胞间产生黏附及通信作用,帮助信号传导并活化细胞;总体细胞量不足,分泌的生长因子浓度会不足以产生利于生长的微环境,以上皆会造成增殖速度迟缓或细胞死亡。
解决方案:细胞传代时,要进行准确的细胞计数,确保铺盘的密度。
1. 细胞冻存的基本原理:慢冻
(1) 手动降温
将细胞依序放在4℃(30分钟)、-20℃(1小时)、-80℃(过夜)后移至液氮中保存。
(2) 程序降温盒
是一般最广泛使用的降温法,为一种特制冷冻容器(填充异丙醇或依靠特制金属导热),使细胞以每分钟约-1℃的速度降至-80℃(过夜),然后移至液氮中保存。
(3) 免液氮程序降温仪
一种新型自动化程序降温方法,通过微处理器精确控制冷却速率和样品温度,能够控制样品线性/非线性降温,能够有效减少冻融过程对于细胞或组织的伤害,重现性好,降温过程可控,成本低。(例如点成生物CRF-1免液氮程序降温仪)
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