马疱疹病毒1型PCR试剂盒

马疱疹病毒1型PCR试剂盒
英文名称：Equine Herpesvirus 1 (EHV-1)
疱疹病毒（herpes virus）是一群有包膜的 DNA 病毒，生物学特性相似，归类为 疱疹病毒科（Herpesviridae）。其感染宿主广泛，主要侵害皮肤、黏膜以及神经组 织，严重影响着人及其他动物的健康。马可能感染多种疱疹病毒。最常见的与感冒病 毒相似，易致呼吸困难。而金溪马术中心发现的是罕见却最严重的马疱疹病毒 1 型 （EHV-1）。它会影响中枢神经系统，可引起步态不稳、无法排尿、尾部下垂及无法 站立。年龄偏大、易感的马匹可能无法存活。马疱疹病毒 1 型(EHV-1)经感染甚至重 复感染马后产生的免疫力是短期的,且马在一生中可以受到几次感染。因此灵敏快捷的 诊断产品具有重要的意义。本公司产品开发马疱疹病毒 1 型荧光定量 PCR 试 剂盒。

产品特点：
1. 即开即用，用户只需要提供病毒样品。
2. 根据马疱疹病毒1型保守序列设计的专一性引物，与相关病毒无交叉反应。
3. 灵敏度可以达到几百拷贝/反应。
4. 一管式荧光定量 PCR 检测，避免后续污染。
5. 本试剂盒足够 50 次 20μL 反应体系的荧光定量 PCR。
6. 本产品只适用于科研，不能用于临床诊断。

马疱疹病毒1型PCR试剂盒包装规格及成分：

编号	成分	规格
试剂一	PCR MagicMix 3.0	1 mL（红盖）
试剂二	超纯水	1 mL（亮黄色）
试剂三	马疱疹病毒1型 PCR 引物混合液	100 μL（白盖）
试剂四	马疱疹病毒1型 PCR 阳性对照 （1×10E8 拷贝/μL）	50 μL（黄盖）
试剂五	使用手册	1 份

运输及保存：低温运输，-20℃保存，保存期限为一年。阳性对照需要单独放置，不要污染其 他试剂。

自备试剂：DNA 模板


 

使用方法：

一、样品 DNA 的制备
1. 用自选方法纯化 N+2 个样品的 DNA，本试剂盒跟市场上大多数核酸提取试剂盒兼容。
2. 如果有 N 个样品，则需要做 N+2 个提取，包括一个样品制备阳性对照和一 个样品制备阴性对照。样品制备阳性对照是在适量水（取决于试剂盒要求 的样品起始量）中加 10μL 马疱疹病毒1型 PCR 阳性对照的 1000 倍稀释液 而得，样品制备阴性对照是直接用水。提取结束后最后得到模板 DNA 放冰 上待用。
二、设置 PCR 反应（40μL 体系）
3. 对 N+2 个样品，在 PCR 时需要增加一个 PCR 阳性对照和一个 PCR 阴性 对照，故需要设置 N+4 个反应。在 N+4 个 PCR 管中分别加入下列成分：

成分	N+2 个 样品管	PCR 阴性 对照	PCR 阳性 对照
PCR Magic Mix 3.0	各 20 μL	20 μL	20 μL
马疱疹病毒1型 PCR 引物 混合液	各 2 μL	2 μL	2 μL
N+2 个样品 DNA 模板	各 18 μL
PCR 阴性对照（水）		18 μL
PCR 阳性对照（马疱疹病毒1型 PCR 阳性对照的 1000 倍稀释液）			18 μL

4. 按下表设置 PCR 反应：

过程	温度	时间
预变性	95℃	5 min
PCR 反应 （35 个循环）	95℃	30 sec
	55℃	30 sec
	72℃	30 sec
最后延伸	72℃	7 min

三、电泳检测 5. 取 10-20 μL PCR 产物。1%琼脂糖凝胶电泳检测 PCR 产物。本产品提供的 PCR Mix 在扩增结束后可以直接上样，不需要另外再加 loading buffer。阳性对照必须有预期条带出现，阴性对照必须无任何扩增，否则实 验无效。对没有扩增产物的样品，可以稀释 10 倍后重复 PCR 扩增以排 除 PCR 抑制剂的感染。


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