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- 2025年08月19日
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- 详细信息
- 文献和实验
- 技术资料
- 库存：
100
- 英文名：
Dictyocaulus spp.
- 保质期：
1年
- 供应商：
上海晅科生物科技有限公司
- 保存条件：
-20℃
- 规格：
50次
英文名称：Dictyocaulus spp.
荧光定量PCR( realtime fluorescence quantitative PCR，RTFQ PCR) 是1996 年由美国Applied Biosystems 公司推出的一种新定量试验技术，它是通过荧光染料或荧光标记的特异性的探针，对PCR产物进行标记跟踪，实时在线监控反应过程，结合相应的软件可以对产物进行分析，计算待测样品模板的初始浓度。为此本公司开发了简单快捷的网尾线虫通用PCR试剂盒。
产品特点：
1. 即开即用，用户只需要提供 DNA 模板。
2. 引物经过精心优化，专一性强，只扩增网尾线虫通用。
3. 提供阳性对照，便于区分假阴性样品。
4. PCR mix 中含上样染料，PCR 后可以直接上样电泳。
5. 本试剂盒足够做 40μL 体系的 PCR 50 次，但只能用于科研。
网尾线虫通用PCR试剂盒包装规格及成分：
| 编号 |
成分 |
规格 |
| 试剂一 |
PCR MagicMix 3.0 | 1 mL（红盖） |
| 试剂二 |
超纯水 | 1 mL（亮黄色） |
| 试剂三 |
网尾线虫通用 PCR 引物混合液 | 100 μL（白盖） |
| 试剂四 |
网尾线虫通用 PCR 阳性对照 （1×10E8 拷贝/μL） | 50 μL（黄盖） |
| 试剂五 |
使用手册 | 1 份 |
运输及保存：低温运输，-20℃保存，保存期限为一年。阳性对照需要单独放置，不要污染其 他试剂。
自备试剂：DNA 模板
使用方法：
一、样品 DNA 的制备
1. 用自选方法纯化 N+2 个样品的 DNA，本试剂盒跟市场上大多数核酸提取试剂盒兼容。
2. 如果有 N 个样品，则需要做 N+2 个提取，包括一个样品制备阳性对照和一 个样品制备阴性对照。样品制备阳性对照是在适量水（取决于试剂盒要求 的样品起始量）中加 10μL 网尾线虫通用 PCR 阳性对照的 1000 倍稀释液 而得，样品制备阴性对照是直接用水。提取结束后最后得到模板 DNA 放冰 上待用。
二、设置 PCR 反应（40μL 体系）
3. 对 N+2 个样品，在 PCR 时需要增加一个 PCR 阳性对照和一个 PCR 阴性 对照，故需要设置 N+4 个反应。在 N+4 个 PCR 管中分别加入下列成分：
| 成分 | N+2 个 样品管 | PCR 阴性 对照 | PCR 阳性 对照 |
| PCR Magic Mix 3.0 | 各 20 μL | 20 μL | 20 μL |
| 网尾线虫通用 PCR 引物 混合液 | 各 2 μL | 2 μL | 2 μL |
| N+2 个样品 DNA 模板 | 各 18 μL | ||
| PCR 阴性对照（水） | 18 μL | ||
| PCR 阳性对照（网尾线虫通用 PCR 阳性对照的 1000 倍稀释液） | 18 μL |
4. 按下表设置 PCR 反应：
| 过程 | 温度 | 时间 |
| 预变性 | 95℃ | 5 min |
| PCR 反应 （35 个循环） | 95℃ | 30 sec |
| 55℃ | 30 sec | |
| 72℃ | 30 sec | |
| 最后延伸 | 72℃ | 7 min |
三、电泳检测 5. 取 10-20 μL PCR 产物。1%琼脂糖凝胶电泳检测 PCR 产物。本产品提供的 PCR Mix 在扩增结束后可以直接上样，不需要另外再加 loading buffer。阳性对照必须有预期条带出现，阴性对照必须无任何扩增，否则实 验无效。对没有扩增产物的样品，可以稀释 10 倍后重复 PCR 扩增以排 除 PCR 抑制剂的感染。
网尾线虫通用PCR试剂盒相关产品：
| 产品名称 |
方法 |
产品规格 |
价格 |
| 网尾线虫通用LAMP试剂盒 | LAMP |
50次 |
2490 |
| 网尾线虫通用PCR试剂盒 | PCR |
50次 |
1990 |
| 网尾线虫通用染料法荧光定量PCR试剂盒 | 染料法 |
50次 |
2490 |
| 网尾线虫通用探针法荧光定量PCR试剂盒 | 探针法 |
50次 |
2990 |
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,即在oligo(dT)引物的3'端引入两个简并的核苷酸【5'-Oligo(dT)16_30MN-3', M=A/G/C;N=A/G/C/T】，使引物定位在poly(A)尾的起始点。从而消除了在合成第一条cDNA链时oligo(dT)与poly(A)尾的任何部位的结合所带来的影响;改进之二是在5‘端加尾时，采用poly(C)，而不是poly(A);改进之三是采用RNase H一莫洛尼氏鼠白血.病毒(MMLV)反转录酶或选择嗜热DNA聚合酶可能在高温h (60 度 -70度 )有效地逆转录mRNA。从而消
尽管鱼港放养密度一般不大，发生疾病不多，但也应引起重视。常见有鱼虱病、线虫病、水霉病等。只要平时加强管理，注意水质变化，可以减少疾病的发生。敌害主要包括凶猛鱼类、鸟类以及鱼港内生长过多的杂草和藻类等造成的危害。对不同的灾害，要采取相应的措施，加以防治。 （七）收获 南方鱼港的收获主要分平时捕捞和大收，平时捕捞主要收虾蟹，大收主要收鱼类。北方则主要是大收，一般是9月份收虾，10月收鱼。 收获方法主要有顺水捕捞、逆水捕捞、套旋、锥形网、小拉网、手
