致泻性大肠杆菌（致泻性大肠埃希氏菌）通用PCR试剂盒

致泻性大肠杆菌（致泻性大肠埃希氏菌）通用PCR试剂盒
英文名称：Diarrheagenic E. PCR Kit
能够引起肠道内急性腹泻的大肠杆菌统称为致泻性大肠杆菌，根据致病性的不同，致泻性大肠埃希菌被分为五种，即肠致病性大肠埃希氏菌(EPEC)、肠 产肠毒素大肠埃希氏菌(ETEC)、肠侵袭性大肠埃希氏菌(EIEC)、肠出血性大 肠埃希氏菌(EHEC)和粘附性肠埃希氏菌(EAEC)。，我国发生的食物中毒事 件中，细菌性食物中毒的人数最多，占总中毒人数的42.8％，其中致泻性大 肠埃希氏菌是引起人体以腹泻症状为主的全球性疾病的常见病原菌，在我国引起感染性腹泻的发病率居所有传染病之首，因此快速灵敏检测致泻性大肠杆菌具有重要意义。本产品就是根据PCR原理开发的专门检测致泻性大肠杆菌的试剂盒。

产品特点：
1. 即开即用，用户只需要提供样品DNA模板。
2.提供阳性对照，便于区分假阴性样品。
3.产品精心优化且特异性高，引物是根据致泻性大肠杆菌DNA高度保守区设计，不会跟除此之外的其它微生物DNA发生交叉反应。
4.PCR mix 中含上样染料，PCR 后可以直接上样电泳。
5.本产品足够50次20μL体系的PCR反应。
6.本产品只能用于定性实验，不能用于定量。
7.本产品只能用于科研。

致泻性大肠杆菌（致泻性大肠埃希氏菌）通用PCR试剂盒包装规格及成分：

编号	成分	规格
试剂一	PCR MagicMix 3.0	1 mL（红盖）
试剂二	超纯水	1 mL（亮黄色）
试剂三	致泻性大肠杆菌 PCR 引物混合液	100 μL（白盖）
试剂四	致泻性大肠杆菌 PCR 阳性对照 （1×10E8 拷贝/μL）	50 μL（黄盖）
试剂五	使用手册	1 份

运输及保存：低温运输，-20℃保存，保存期限为一年。阳性对照需要单独放置，不要污染其 他试剂。

自备试剂：DNA 模板


 

使用方法：

一、样品 DNA 的制备
1. 用自选方法纯化 N+2 个样品的 DNA，本试剂盒跟市场上大多数核酸提取试剂盒兼容。
2. 如果有 N 个样品，则需要做 N+2 个提取，包括一个样品制备阳性对照和一 个样品制备阴性对照。样品制备阳性对照是在适量水（取决于试剂盒要求 的样品起始量）中加 10μL 致泻性大肠杆菌 PCR 阳性对照的 1000 倍稀释液 而得，样品制备阴性对照是直接用水。提取结束后最后得到模板 DNA 放冰 上待用。
二、设置 PCR 反应（40μL 体系）
3. 对 N+2 个样品，在 PCR 时需要增加一个 PCR 阳性对照和一个 PCR 阴性 对照，故需要设置 N+4 个反应。在 N+4 个 PCR 管中分别加入下列成分：

成分	N+2 个 样品管	PCR 阴性 对照	PCR 阳性 对照
PCR Magic Mix 3.0	各 20 μL	20 μL	20 μL
致泻性大肠杆菌 PCR 引物 混合液	各 2 μL	2 μL	2 μL
N+2 个样品 DNA 模板	各 18 μL
PCR 阴性对照（水）		18 μL
PCR 阳性对照（致泻性大肠杆菌 PCR 阳性对照的 1000 倍稀释液）			18 μL

4. 按下表设置 PCR 反应：

过程	温度	时间
预变性	95℃	5 min
PCR 反应 （35 个循环）	95℃	30 sec
	55℃	30 sec
	72℃	30 sec
最后延伸	72℃	7 min

三、电泳检测 5. 取 10-20 μL PCR 产物。1%琼脂糖凝胶电泳检测 PCR 产物。本产品提供的 PCR Mix 在扩增结束后可以直接上样，不需要另外再加 loading buffer。阳性对照必须有预期条带出现，阴性对照必须无任何扩增，否则实 验无效。对没有扩增产物的样品，可以稀释 10 倍后重复 PCR 扩增以排 除 PCR 抑制剂的感染。


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